注射用过氧化碳酰胺细菌内毒素检查方法的建立.docVIP

精品论文 参考文献 注射用过氧化碳酰胺细菌内毒素检查方法的建立 高淑梅 费丽娜 吉林市中西医结合肛肠医院 132001 吉林市食品药品检验所 132001 摘要: 目的 通过对注射用过氧化碳酰胺细菌内毒素凝胶法试验，建立注射用过氧化碳酰胺的细菌内毒素检查法。方法 采用《中国药典》2010 年版二部附录 中检测细菌内毒素的凝胶法，即采用细菌内毒素工作标准品与鲎试剂产生凝集反应的机理,判断注射用过氧化碳酰胺中细菌内毒素的限量。结果 鲎试剂灵敏度在 0.5EU/ml 时, 注射用过氧化碳酰胺稀释到浓度1.4mg/ml 时，对细菌内毒素测定无干扰。结论 使用细菌内毒素凝胶法检测注射用过氧化碳酰胺中的污染内毒素是可 行的，可以用细菌内毒素凝胶检查法代替家兔热原检查法。 关键词: 细菌内毒素 鲎试剂 注射用过氧化碳酰胺 注射用过氧化碳酰胺为白色结晶或结晶性粉末，易溶于水，遇强 氧化物或还原物可分解。本品主要成分为碳酸酰胺过氧化氢。临床用 于治疗各种低氧血症以及急性缺氧引起的胎儿窘迫。目前该品种中的 内毒素检查为家兔热原试验法，不仅费时、费力、干扰因素多，而且 结果的重现性差；采用检测细菌内毒素的凝胶法，则可避免以上缺陷， 直接检测出供试品中污染的内毒素；本实验报道用凝胶法检测注射用 过氧化碳酰胺中的细菌内毒素的可行性研究。 1 材料与方法 1. 1 材料 细菌内毒素工作标准品(180 EU/ 支,中国药品生物制 品检定所生产,批号150601－200965) 。鲎试剂灵敏度0.5 EU/ml, 湛江 博康海洋生物有限公司生产( 批号:051020) 。细菌内毒素检查用水, 湛 江安度斯生物有限公司生产, (批号:050960)。注射用过氧化碳酰胺, 0.1g/ 支,多菲制药（中国）有限公司生产（批号20110802、。 1. 2 方法 1. 2. 1 复核鲎试剂灵敏度的标示值(lambda;b) 将细菌内毒素工作标 准品用细菌内毒素检查用水溶解,并在快速混匀器上充分混合15 分 钟 ,将工作标准溶液稀释成2、1、0.5 、0.25lambda;b 等系列浓度,每一浓度 稀释液平行做4 管,结果符合规定,按下式计算鲎试剂灵敏度测定值(lambda; c) 。 lambda;c = lg- 1 （Sigma;Ⅹ/4） X 为反应终点浓度的对数值。 lambda;c = 0.5 EU/ml。 1. 2. 2 细菌内毒素限值(L) 的确定 参照注射用过氧化碳酰胺说 明书按公式: L = K/ M ,式中K为人每公斤体重每小时最大可接受的内 毒素剂量,注射液的K = 5EU/（kgbull;h），每小时人体可以接受的最大内 毒素剂量为 ( 5Eu/kg#12539;hr )times;60 = 300 Eu/hr ( 人平均体重按60kg 计 算 ) ，而注射用过氧化碳酰胺人用每次最大剂量为1g，溶于500 ml 葡 萄糖注射液或氯化钠注射液中，葡萄糖注射液或氯化钠注射液的内毒 素限值为0.5 Eu/ml ，按每小时250ml 输入人体计算，则葡萄糖注射 液或氯化钠注射液带入的内毒素最大量为125 Eu/hr，故注射用过氧 化碳酰胺允许带入的内毒素最大量为300-125=175Eu/hr 。因为注射 用过氧化碳酰胺每小时注入人体量为500mg，所以注射用过氧化碳酰 胺细菌内毒素限值为175/500=0.35Eu/mg。 1. 2. 3 供试品的最大有效稀释倍数(MVD)计算 以鲎试剂灵敏度lambda;b = 0.5EU/ml为基准，根据公式MVD =cL/lambda;b = 2mg/mltimes;0.35/ 0.5 =1.4 倍。即供试品浓度稀释为1.4mg/ml时，可进行 试验。 1. 2. 4 干扰实验 取3 个批号的注射用过氧化碳酰胺,用细菌内 毒素检查用水分别稀释成2.0mg/ml、1.8mg/ml 、1.6mg/ml、1.4mg/ml 系列浓度,将细菌内毒素工作标准品稀释成2、1、0.5 、0.25lambda;b 系列 浓度与鲎试剂进行干扰实验。实验表明，只有在供试品浓度稀释为 1.4mg/ml 时,鲎试剂灵敏度为0.5EU/ml时对测定无干扰， Es、Et 都在 0. 5lambda;～2lambda;范围内。见表1。 表1 3 批注射用过氧化碳酰胺干扰实验结果 根据上述试验条件测定数据,从3 批供试品中随机各抽取2 支,按 批次分为3 组,将供试品稀释成浓