pH和Ca2对L谷氨酸氧化酶发酵生产的影响研究.pdfVIP

第二届全国发醉工程学术讨论会论文集 1998 pH和C扩十对L一谷氨酸氧化酶发酵生产的影响 方庆华、诸剑肉、李青山、钟建江 (华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237) 摘耍:研究了在自动控制嫂中PH和。卜对灰色链招菌(Sheptomyaes)NI生长 和L一谷氨酸产且的影响.在pH6.2,6.7,7.0,7.3条件下.菌产W1*分别为2.8,4.2, 6.0和5.3IU/ml。同时随着pH从6.2上升至7.3菌体生长受到抑制，菌体都呈 现结球现象.当在培养基中加入60mWaN时，茵体生长受到抑制，同时菌体不 结球，但在pH6.7条件下，C尹加入使醉产里提高1.2倍. 关键词:pH、Ce,L一谷氮酸氧化醉、链霉菌、发醉生产、生物rstve L一谷氨酸氧化酶(GluOx)是催化L一谷氮酸氧化脱氨产生H202的酶。它被 用来测定L一谷氨酸或制成测定L一谷氨酸的生物传感器。可用于发酵工业、食 品工业中成分的分析。在临床医学中，它可用于谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶 (GPT)和谷氨酞胺2等多种生物活性物质的分析测定.同其它酶联合使用后.L 一谷氨酸氧化酶也可用于动物细胞培养中对谷氨酸的在线测定和在食品或药品 中对天冬氨酸3及天冬酸胺毛的测定，作者’通过菌种筛选获得了一株胞外高产L 一谷氨酸氧化酶的菌种，并对其发酵工程研究作了一些初步探讨 ‘一’，本文则报 道pH和Cat+对灰色链霉菌Nl生长和胞外L一谷氨酸氧化酶产量的影响。 1.材料和方法 1.1菌种: 灰色链霉菌(Streptomyces.sp)NI由本文作者选育得到5。 1.2主要试剂 : 辣根过氧化物酶(华美生物工程公司)，4一氨基安替比林(天津市化学试剂三厂) 1.3培养基: 1.3.1种子培养基%():戮皮抽提液5，琼脂1.5-2，玉米桨0.05。起始为pH6.7。 1.3.2发醉培养基%():葡萄糖3，硫酸按0.6，氛化镁0.1，叙化钾0.1，玉米浆 。，，磷酸二氢钠 。.09，反应器为5.-L全自控发酵W(B.Braun). 1.4种子制备: 斜面试管接种后，于28℃，98%湿度条件下培养6天，用作发酵罐种子(接 入抱子数为109). LS细胞生长的测定: 从发酵雄中取样。样品在4000rpm条件下离心20分钟，去除上清液。用去 离子水洗涤数次，离心沉降细胞在60℃烘箱中干燥至恒重。 1.6 L一谷氨酸氧化酶活力测定 根据玩岛的产生，使用分光光度计测定L一谷氨酸氧化酶活性。将1.Onli4 一氨ti安替比林((2MM),2ml苯M(3nliNo,0.1nli过氧化物酶(60U/ml)和。Arni样品在 一141一 第二届全国发醉工程学术讨论会论文集 1998 28℃混合。在505nm波长下测定单位时间内吸光度的变化量，并计算L一谷氨 酸氧化酶活力。以在上述条件(PH6.3,28℃)，每分钟由底物产生11tmo1H202所需 酶量定义为1个酶活单位(1功。 仁 2.结果和讨论 2.1姆 对菌体生长和产酶的影响 试验不同PH条件下菌体生长和产酶的情况。由图1可见，菌体生长速度和 最大细胞量都随着pH从6.2上升至7.0而下降。在pH6.2条件下，培养30小时 后细胞量达到最大傲19g/L)，而pH7.0条件下，细胞量最大值(15叭)则出现在培 养43小时后. 由图2可见，从培养24小时后微生物开始分泌L一谷氨酸氧化酶。并随着 pH从6.2上升至7.0，L一谷氨酸氧化酶产酶时间也延长了。当PH为7.0时，发 酵液中酶活达到最大值(6.OIU/ml)。该产量为摇瓶中最高产量(1.ON/ml)的6倍 ‘。 1 ( 日 ︵ 锰 j 召 吠 场 曰 七 1 1 李 。 ﹁ 蓄 占 “ ︵ ︶ 二 6 Time(hr) 图1.GluOx生产状况.控制pH为: