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鱼藤内生真菌代谢产物的杀虫活性研究 摘 要 本文是以毛鱼藤、白花鱼藤、蜜花鱼藤、肇庆鱼藤等鱼藤属植物的内生真菌为研究 对象，对鱼藤属植物的内生真菌的代谢产物进行高效液相色谱 (HPLC)检测和紫外吸收 检测，并结合生物活性测定，从中筛选到一株对蚜虫、靖类和小菜蛾等具有较高生物活 性并且产生鱼藤酮或其类似物的毛鱼藤内生青霉，进而系统研究了该菌的培养条件、活 性代谢成分、作用机制及田间应用情况。 内生青霉菌在马铃薯葡萄糖 (PDA)培养液和鱼藤煎汁培养液中的生长量和代谢产 物的生物活性显著高于其他培养液类型。在 PDA培养液和鱼藤煎汁培养液中， 10.00mg/mL内生青霉菌代谢产物对萝 卜蚜成蚜 24h的校正死亡率分别为67.59%和 70.62%.48h的校正死亡率分别为81.63%和91.86%a采用玻片浸溃法处理柑桔全爪蜗， 在PDA培养液和鱼藤煎汁培养液中，5.00mg/mL内生青霉菌代谢产物对柑桔全爪蜻24h 的校正死亡率分别为83.84%和75.62%,48h的校正死亡率分别为88.69%和90.49%。但 综合考虑各种因素，决定以PDA培养液为本研究的基本培养液。 用冷浸法、组织研磨法、超声波法、索氏提取法等4种提取方法对青霉菌丝体进行 提取试验，超声波法能够提取内生青霉菌丝体中大量的杀虫活性物质，提取率可达 4.156%。采用叶片浸渍法，对蚜虫24h和48h的LC05分别为3.056mg/mL和1.848mg/mLo 20.00mg/mL的超声波法提取物对小菜蛾3龄幼虫24h的拒食率为51.46%. 甲醇、 乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酷、正丁醇等6种溶剂的内生青霉菌丝体提取 物的生物活性测定结果表明，氯仿是最好的提取溶剂。氯仿提取物对萝 卜蚜成蚜24h和 48h的LC50分别为1.570mg/ML和0.953mg/mLe20.00mg/mL氯仿提取物对斜纹夜蛾3 龄幼虫24h的拒食率达53.21%. 内生青霉发酵液的氯仿、石油醚、乙酸乙醋、正丁醇等4种溶剂萃取物生物活性的 测定结果表明，氯仿萃取物对萝 卜蚜成蚜24h和48h的LC50分别为3.445mg/mL和 2.202mg/mL,20.OOmg/mL氯仿萃取物对斜纹夜蛾4龄幼虫进行触杀作用测定，3d的校 正死亡率可达72.41%.由此可以得出，氯仿是内生青霉活性产物的最好萃取溶剂。 以内生青霉的培养温度、PH值、时间、装液量等4项因素进行四元二次通用回归 旋转组合设计试验，其中每个因素设定5个水平。根据不同培养条件优化试验结构矩阵 对青霉菌丝体产量、萝 卜蚜毒杀活性和小菜蛾幼虫拒食活性的影响，最终确定鱼藤内生 青霉菌的较优培养方案为:培养温度为221C,PH值为6、时间为Ild,装液量为120mL. 将内生青霉菌丝体氯仿提取物进行硅胶柱层析，获得 12个馏分。生物活性的测定 结果表明，馏分D,E和1表现出较高的毒杀活性，以1.00mg/mLPotter喷雾法处理萝 卜蚜成蚜，24h的校正死亡率分别为57.68%,63.28%,69.74%;2.50mg/nd.处理对小菜 蛾3龄幼虫24h的拒食率分别为59.91%,72.65%,67.58%;5.00mg/ML处理对斜纹夜蛾 3龄幼虫24h的非选择性拒食率分别为42.10%,48.79%,46.57%a 将青霉菌丝体氯仿提取物柱层析所得各馏分进行HPLC检侧和紫外扫描检测，馏分 D中检测出与鱼藤酮标样保留时间相同的峰，并且该色谱峰所对应的组分与鱼藤酮标样 具有相似的紫外吸收图谱，进一步说明馏分D中的活性成分为鱼藤酮或其类似物。 馏分D,E和J等对桃蚜和小菜蛾的生物活性测定结果表明。馏分J对桃蚜若蚜24h 和48b的LCso和LC90分别为0.432mg/mL,0.395mg/mL和2.656mg/nIL,2.040mg/ML; 馏分E对小菜蛾3龄幼虫24h和48h的AFCS。和AFC9o分别为。.893mg/mL,0.976mg/mL 和3.759mg/mL,4.454mg/mL;采用叶蝶法对小菜蛾3龄幼虫进行选择性拒食活性测定， 馏分E对小菜蛾24h和48h的AFC50和AFC9o分别为1.765mg/mL,1.351mg/mL和 8.347mg/mL,5.383mg/mLo 作用机理研究结果表明，馏分D和鱼藤酮均可以不同程度抑制家蚕4龄幼虫的呼吸 作用。200Pg/头的馏分D处理对家蚕4龄幼虫20min后的呼吸抑制率为24