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现代仪器分析色谱分析法王宇晓 气相色谱仪及色谱质谱联用技术 液相色谱仪及色谱质谱联用技术 一、色谱分析的概述 俄国植物学家Tswett 1901年发现： 利用吸附原理分离植物色素 1903年发表文章：On a new category of adsorption phenomena and their application to biochemical analysis 1906年Tswett 创立“chromatography”—“色谱法”新名词 试样在色谱柱分离示意图 二、气相色谱仪及联用技术 1、GC 的分析过程 气相色谱主要利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离。待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体带入色谱柱，柱内含有液体或固体固定相，由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性能不同，每种组分都倾向与流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。 由于载气的流动，使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附或解析，结果在载气中分配浓度大的组分先流出色谱柱，而在固定相中分配浓度大的样品后流出。当组分流出色谱柱后，立即进入检测器。检测器能将样品组分的存在与否变为电信号，电信号的大小与被测组分的量或浓度成比例。 GC 的分析流程图 样品色谱图 2、气相色谱仪的构成 气路系统 进样系统 柱系统 检测系统 计算机控制 及数据处理系统 2、气相色谱仪的构成 气路系统 进样系统 柱系统 检测系统 计算机控制 及数据处理系统 2.3检测系统 检测器是色谱仪的“眼睛” 气相色谱检测器可分为浓度型检测器与质量型检测器：浓度型检测器的响应值和组分的浓度成正比，质量型检测器的响应值和单位时间内进入检测器的质量成正比。 常用的浓度型检测器有：热导池检测器(TCD)、电子捕获检测器(ECD) 常用的质量型检测器有：氢火焰电离检测器(FID)、火焰光度检测器(FPD) 柱温的影响色谱柱温度主要有样品的复杂程度和汽化温度决定。 3.4进样时间和进样量的选择 外标法 利用标准品做标准曲线，在线型范围内，求得样品的浓度的一种定量方法。 4.3建立气相色谱的方法 4.4应用实例 5、联用技术 质谱法是一种重要的定性鉴定和结构分析方法，但没有分离能力，这一点与色谱法刚好互补，后者是一种很好的分离方法，特别适合于复杂混合物的分离，但对组分的定性鉴别有困难。将两种方法结合起来就可以发挥两者的优点，解决发展混合物的分离和鉴定。 质谱可以看成气相色谱的一个检测器，通过测定样品的分子量及结构信息，确定化合物。 正十二烷EI质谱图 基线(base line)——经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。 噪音(noise)——基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。 漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。 死时间(dead time，t0)——不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。 死体积(dead volume，V0)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。V0＝F×t0（F为流速） 六通阀使用和维护注意事项： 1)样品溶液进样前必须用0.45μm滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。 2)转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。 3)为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。 5、液相色谱质谱联用技术 ESI \APCI 新的电离技术的发展为液质联用仪商品化奠定了基础，现在液质联用广泛应用于化学，化工，环境，能源，医药，运动医学，刑侦科学，生命科学，材料科学等各个领域。 液质联用仪 样品的液相色谱图 总离子流图 主峰的质谱图 2）利用检测器的选择性进行定性分析 热导池检测器(FCD)：对有机化合物和无机化合物均有响应，但灵敏度较低； 氢焰检测器(FID)：对有机化合物灵敏度高，对无机气体、水分等响应很小； 电子捕获检测器(ECD)：对卤素、氧、氯等电负性强的组分有很高的灵敏度，对不含卤素