建立人类骨肉瘤之斑马鱼动物模式.pdfVIP

致謝 首先必須感謝蕭崇德與顏厥全老師給予學生參與專題的機會，由 於我在課業上並不是非常傑出，對於一些生物研究上的知識也不是非 常了解，但憑藉著老師多年且豐富的專業指導下，使 學生對於專題的 組織架構不只更 充分的了解，也引起了學生對於研究的興趣。老師經 常給予精闢的建言也給學生很多幫助，讓我在實驗方面的想法能更多 元、更完善。此外，老師也不吝嗇分享珍貴的自身經驗，讓學生在實 驗上能吸收老師的經驗，做起實驗更有效率。 另外也感謝學長陳吉芳與屈哲宇 以及學姐邱群鳳在實驗室長期 的指導與幫忙，即使在他們百忙之中也會不吝嗇於抽 空指導學生的實 驗，並且將他們的專業知識與長期體會的實驗重點鉅細靡遺分享給學 生，也感謝其他一起在實驗室奮鬥的專題生同學。若沒有學長姐們在 背後默默的幫助及同學間的互相勉勵，相信我在研究這條路上會更加 艱辛，非常感謝每一個在我生命中的貴人。 最後還要感謝 蔡敬民老師慷慨借用組織切片機，以及詹文雄 老師 慷慨借用高解析力光學顯微鏡及照相機，才有辦法呈現出辛苦的實驗 結晶。 1 中文摘要 骨肉瘤 (osteosarcoma) 為紡錘狀的細胞肉瘤，是一種形成於人類 骨頭上的惡性腫瘤 發生骨肉瘤的原因通常是放射治療後或某些， 疾病 會伴隨骨肉瘤的形成 ，例如Li-Fraumeni 症候群 (主要是由於抑癌基 因 p53 基因發生突變) 。在小鼠的研究中，已證明若將p53和 pRb 此 兩種抑癌基因去活化會造成骨肉瘤的形成，但其詳細的發病機制尚未 完全了解。 本實驗擬以斑馬魚為實驗動物，利用硬骨細胞專一啟動子， 以基 因轉殖的技術將人類常見的致癌基因專一 表現在斑馬魚的硬骨細胞 中，例如 HPV-E6可使 Ubiquitin 與p53 結合 ，使之受 Proteasome 辨 識，造成 p53 大量降解。c-Myc 為促進細胞增生的因子之一，會促使 Rb磷酸化，活化下游生 長因子 E2F1 以活化細胞週期，造成細胞增 生，藉此誘發骨肉瘤 ，以動態觀察腫瘤在不同時 期的表現。目前已建 cy25 立了Tg (Ola.Sp7:nlsGFP) 轉基因斑馬魚，可在全身硬骨細胞中表 現綠色螢光蛋白，日後將與帶有致癌基因之斑馬魚交配，可利用綠螢 光觀察突變魚硬骨的詳細變化。這個人類骨肉瘤之斑馬魚動物模式的 建立，將有助於更加了解人類骨肉瘤致病的原因，並可以建立後續小 藥物篩選的動物平台。 2 英文摘要 Osteosarcoma is a kind of spindle cell sarcoma, malignant tumor formed on human bone. The reasons that cause osteosarcoma are usually after radiation therapy or some diseases have high risk accompaning with formation of osteosarcoma. For example, Li-Fraumeni syndrome, mainly caused by mutation of the tumor suppressor gene p53. Recently studies conducted in mice have indicated that inactivation of p53 and pRb cause the formation of osteosarcoma in vivo. But the genetic and cellular mechanisms underpinning this disease remain unknown . We used zebrafish as