实验二、简单染色法.ppt

实验二 细菌的简单染色;目的要求;染料是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。前者赋予染料颜色特征，后者使染料能形成盐。 常用的微生物细胞染料都是盐，分酸性染料和碱性染料两大类：美蓝（即亚甲蓝）、结晶紫、碱性复红、番红（即沙黄）、孔雀绿等都属于碱性染料；酸性复红、伊红及刚果红属于酸性染料。;由于微生物细胞含有大量水分，对光线的吸收和反射与水溶液的差别不大,机体是无色透明的，与周围背景没有明显的反差,在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构。 微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物组成。所以，微生物细胞表现出两性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带正电。在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。;微生物染色原理;染色方法;涂片;作业;1、涂片;;2、干燥;3、固定;4、染色;5、水洗;6、干燥;7、镜检;显微镜的基本结构（P41）;显微镜使用操作步骤;1、观察前的准备;2、显微观察;将标本玻片置于载物台上(注意标本朝上)，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象处于物镜的正下方。 ;下降低倍物镜，从侧面注视调节，使其接近标本。 双眼看目镜，慢慢旋转粗调节螺旋使镜筒缓慢升起，至视野内出现物象后，改用细调节螺旋，上下微微转动，直至视野内获得清晰的物象。 慢慢移动玻片夹推动器，寻找要观察的部位，置于视野中心，观察、记录结果，并准备换高倍镜观察。;将高倍物镜转至镜筒下方 (在转换物镜时，要从侧面注视，以防低倍镜未对好焦距而造成镜头与玻片相撞) 。 调节光圈和聚光镜，使光线亮度适中，再仔细转动微调螺旋，调节焦距，获得清晰物象，移动推动器选择最满意的镜检部位，待油镜观察。 ;用粗调螺旋将镜筒上升，转动转换器将油镜转至镜筒正下方。 在标本镜检部位滴上一滴香柏油。 从侧面注视，慢慢转动粗调螺旋，小心下降镜筒，使油镜浸入油中，并几乎与标本接触时为止(注意切勿压到标本，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头)。 调节聚光器及照明后，眼看目镜，微微转动粗调螺旋将镜筒上升，当视野中有模糊的标本物象时，改用细调螺旋，并移动标本直至标本物象清晰为止。;油镜的工作原理（P42）;1、增加照明亮度;一些物质的折射率： 水 1.33 玻璃 1.52 空气 1.0 香柏油 1.515 ;2、增加显微镜的分辨率;香柏油的折射率大于空气和水，因此，它作介质时，数值孔径值高于低倍镜和高倍镜。 数值孔径值越大，显微镜最小可分辨距离越小，即分辨率越高。 ;观察完毕，上升镜筒，取下标本片。 先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾少量二甲苯擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦去残留的二甲苯。 用绸布擦净显微镜的金属部件。 将各部分还原，关闭电源, 将接物镜转成八字形，再向下旋。罩上镜套，然后放回镜箱中。 填写显微镜使用记录。