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调控pH值提高木聚糖酶活力的研究 洪枫 余世袁 陈牡 南京林业大学化工学院 南京 210037 摘要 通过控制产酶过程pH值能有效提高里氏木祥木聚搪酶活力。结果表明，当控制 产醉pH4.0时，有利于提高木聚糖酶活力，且此pH对提高-0木糖普酶活力的影响更大。HP 调控时间不宜过长，一般应以控制1-2d后让其自由发展为宜。 关锐词 pH 调控 木聚糖酶 半纤维素酶 里氏木霉 中圈分类号 邻56 pH对徽生物生命活动的影响很大。pH的改变会引起细胞膜正负电荷的改变，从而引起 细胞膜透性的变化，影响微生物对营养物质的吸收、酶的形成及活力、代谢途径的改变等。各 类微生物有其不同的最低、适宜及最高州范围，霉菌的pH适宜范围一般在4一6[13。通常认 为[[23，当培养液的pH控制在5.0时，里氏木霉的生长速度最快，而当州为4.5和4.。时，生 长减慢;当pH3.5时，生长速度显著下降。然而，这些pH对产酶的影响并非如此。 据研究，声是影响木聚糖酶合成的决定性因素之一[[33，由于常规法制备木聚糖酶时，对 产醉过程中的pH不加控制，因此产酶周期短，菌丝体死亡快，酶活力也不高。鉴于此，在研究 里氏木酶RutC一30制备木聚糖酶的产酶历程墓础上，探讨了控制产酶过程中pH在低范围 (4.0左右)时对木聚糖酶合成的影响，为今后的生产性研究提供理论依据。 1材料与方法 1.1 菌种 在马铃薯、木糖、琼脂斜面上接种的里氏木酶(Trichodenna二 )RutC一30,置30r-但 温箱中培养7d后，于4℃条件下保存备用。 1.2 木聚粉的制备 用干玉米芯粉碎后，加人10%碱液至固液比为1.10，于120℃条件下抽提30min，吸滤，抽 提液中和至pH为中性后，离心分离，用蒸馏水洗滤渣至乳白色，风干研磨成细小颗粒封存备 用。侧纯度(其中含木聚搪的百分率)。 1.3 培养基 里氏木霉菌丝细胞生长及产醉的培养基在Ivtandels配方]’[基础上稍加改进而成。菌丝体 生长培养基加1.0%木糖,0.15%吐温80,0.1%蛋白脏。产酶底物采用自己制备的玉米芯木 聚糖，起始州用柠檬酸缓冲液调至4.8, 1.4 木聚据醉的制备 采用里氏木霉菌丝细胞，在250mL三角烧瓶中培养。前期温度控制为30th ，后期控 制在281iCI，恒温摇瓶振荡器转速为150.175r/nun。振荡发酵过程中定期取样，用以测定 pH值、木糖浓度、木聚糖残留率及蛋白质浓度等。 LS 醉水解 ·158 · 醉解条件为:底物浓度20g/L,醉液量1%(v/v),pH4.8,50℃条件下于恒沮水浴振瑞器中 以80r/min的转速振荡4h,酶解结束，使酶失活，经离心，取清液储于小瓶中供高效液相色谱 分析。然后进一步计算各糖得率，计算方法如下: 木糖得率(%)=HPLC测得的木糖克数(g)X0.9--醉解底物中木聚糖克数(目x100 木二糖得率(%)=HPLC测得的木二糖克数(g)-酶解底物中木聚糖克数(g)x100 木三糖、木四糖及木五糖的浓度均按木二搪的标准方程计算，得率按上式计算。 低聚糖/木糖=低聚糖得率干木糖得率 低聚糖乙急糖(%)=低聚糖得率令总糖得率x100 注:其中0.9为单糖转换成聚搪的系数，低聚糖得率为木二糖至木五糖得率之和，总糖得 率为木糖至木五糖之和。 1 ‘浏定方法 总还原糖的测定采用DNS(3,5一二硝基水杨酸)法[(51,酶液可溶性蛋白质的测定采用美 国Bio-Rad公司的标准131。木糖等糖类的测定采用高效液相色谱法，色谱条件为:采用 t WatersHPLC246一E型色谱仪，AminexHPX一42A(300x7.8mm)糖柱，高纯水为流动相， PH5-9,流速。.6ml/min,85C，差示析光检测器，外标法测定。木糖和木二糖标准样品购于 i Sigma公司a 2 结果与讨论 培养基的初始州值用lmol几的柠檬酸缓冲溶液调至4.8，产酶过程中用柠檬酶对哪 值进行调控。具体做法为:(A)培