畜禽细菌性疾病实验室诊断要点研究.pdf

畜禽细菌性疾病实验室诊断要点 中国农业大学动物医学院张冰 一、实验室诊断的必要性 在目前规模化的养殖中，细菌性疾病的发生率呈增高的趋势，由于畜禽商 品流通的加大、环境污染的加剧、各种应激因素的增加导致动物对病原菌的易 感性增强，而生产中不合理的用药，细菌性传染病病原的抗药性越来越严重， 使得细菌性疫病的控制难度加大。 另一方面，生产中，动物疫病的病情复杂，发现混合感染增多，在生产中 大约50％以上的疾病都是混合感染或继发感染。混合感染的类型有病毒性混 合感染；病毒性和细菌性混合感染；细菌性混合感染等等，如果且凭临床经验 诊断很难确诊，因此，对动物疫病进行实验室的诊断显得由为重要。 二、细菌病诊断实验室要求 l、微生物实验室工作基本要求除了遵循一般实验室的要求外，还有两点细菌病 诊断实验室必须要达到的基本的原则，一方面是对病料及时处理的原则，一般情 况下，被检的病料在冬天放置室温不超过2天，夏天不超过1天，同时，作为分 离细菌的病料，不能来自加任何防腐剂或用抗菌药物处理的动物或材料；另一方 面，对实验结果的详细记录，包括动物发病情况、如死亡数、日龄、免疫状况等， 脏器的剖解变化、各种实验结果等。 2、实验用玻璃器材的准备 所有的使用器材要求清洁、干燥、无菌，对不同玻璃器材其处理方法不同： 新购入的玻璃器材应先用洗衣粉水洗净，然后泡在1-2％盐酸24小时后，用清水 冲净、干燥备用；对已用过的玻璃器材，在洗涤前必须先进行严格的消毒，而后 再洗涤剂或洗衣粉水洗涤干净；洗净的玻璃器皿倒置于清洁的木架上或铺有清洁 沙布的平台上，令其自然干燥，若需急用，可将其放入50。C左右的干燥箱中迅 速烘干。灭菌的方式有两种，即干热灭菌和湿热灭菌，干热灭菌是利用干烤箱在 160℃下2小时达到灭菌的目的；湿热灭菌往往是采用高压蒸气灭菌，在医用高 压蒸气灭菌锅内，通过蒸气产生的压力，物品在15磅压力下维持20一30分钟就 可以杀灭一切微生物。 3、普通微生物实验室常使用的培养基普通营养琼脂培养基、鲜血营养琼脂培养 基、三糖铁营养琼脂培养基、麦康盖营养琼脂培养基(内含有胆盐，能抑制部分 非病原菌及革兰氏阳性菌生长，而阴性菌能生长，同时，内含有乳糖和中性红， 因此，分解乳糖的菌落呈红色)。 124 三、病料细菌检验程序 当收到病料后，细菌病料总的检验程序包括三个步骤：(1)．病料直接触片、 染色镜检。 (2)．病料划线分离接种在鲜血琼脂平板和麦康盖琼脂平板上，37℃培养，每日检 查生长情况。 (3)．取致病菌的单个菌落接种到三糖铁斜面深层琼脂培养基中，37℃培养观察， 作革兰氏染色、镜检，有些细菌须作接触酶试验猪、鸡的大部分病原菌经上述检 验，结合病变与临诊情况，可作出初步鉴定。在一般情况下，需特殊培养基的致 病菌：如腐败梭菌，破伤风杆菌，A、C型气荚膜菌，放射菌、支原体、结核分 枝杆菌等在常规检验中一般不作培养；如果℃培养3天，在培养基上无菌生长， 则可报告细菌培养阴性；当病料通过触片染色镜检，能进行初步鉴定时，可不进 行划线分离培养，如结核、葡萄球菌病、坏死性肠炎、链球菌病等。 病料采集过程中要注意的是病料要求新鲜并有一定的代表性；另一方面，还 需要严格无菌操作，包括取病变组织和盛料器皿是无菌。常用的培养方式有两种： 有氧培养和厌氧培养，大多数培养温度是在37度。四、猪、鸡常见病原菌的初 步鉴定(一)通过病料涂片、染色、镜检和临床症状可大致确定的病原菌金黄色 葡萄球菌：鸡源金黄色葡萄球菌引起渗出性皮炎用灭菌棉拭子沾取皮下渗液，涂 片，革兰氏染色，镜检可见；革兰氏阳性球菌，菌体呈正规球形，多单个散在， 个别呈3～6个小堆排列，菌体着色均匀。兽疫链球菌D群链球菌：常见兽疫链 球菌D群链球菌引起多种病变，取病料作触片，革兰氏染色，镜检可见：革兰氏 阳性球菌，呈正规球形或椭圆形，着色均匀，单个散在，少数呈7--10的链状排 列或3-4个短链排列。 多杀性巴氏杆菌：怀疑由多杀性巴氏杆菌感染时，取组织病料触片，进行 瑞氏染色，镜检可见多量两端浓染卵圆形杆菌，每个视野2～5个，多单个散在， 菌端钝圆即可。 魏氏梭菌：革兰氏阳性大杆菌，引起1-3臼龄仔猪腹泻，无菌采心血、肺、胸 水、腹水、肝、十二指肠和肠内容物、脾、肾等脏器抹片，经革兰氏染色呈阳性，两端钝园 的单个或双个大杆菌，细菌周围有一无色的亮圈。