环维黄杨星D在大鼠体内的代谢产物研讨.pdf

环维黄杨星D 在大鼠体内的代谢产物研究 文红梅 张正行 中国药科大学药物分析教研室 210009 李伟 池玉梅 南京中医药大学海洋药物研究中心 210029 摘 要 本文对环维黄杨星 D 在大鼠体内 尿 粪便 胆汁中 的代谢产物进行了研究 从粪便中分离 得到2 个代谢产物 经MS 1H-NMR 13C-NMR UV 等鉴定其结构 分别为20-氧化脱甲胺环维黄 杨星 D 20- oxide demethylamino cyclovirobuxine D CM1 和 3N– 去甲基环维黄杨星 D 3N-demethylcyclovirobuxine D CM2 大鼠灌胃 ig 环维黄杨星 D 后收集胆汁与尿液 用高效液相色谱-质谱联用方法测定 通过与 标准化合物的色谱保留时间 分子离子峰 高分辨质谱对照 从胆汁中鉴定出 2 个 相代谢物 CM1 和CM2 通过用葡萄糖醛酸酶酶解 鉴定其水解产物 苷元 从胆汁中确定出2 个 相结合物 即 为环维黄杨星 D 的葡萄糖醛酸结合物 CM3 和 CM2 的葡萄糖醛酸结合物 CM4 从大鼠尿液中 发现1 个 相代谢物CM2 未检测到 相结合物 环维黄杨星 D (cyclovirobuxine D 简称 CVB-D) 是从黄杨科植物中国小叶黄杨 Buxus microphylla Sieb.et Zucc.var.sinica Rehd. et willa 及其同属植物中提取而得到的生物碱 现收载于 中国 药典 2000 年版一部 它具有行气活血 通络止血之功效 临床上主要用于气滞血瘀所致的胸痹心痛 脉结代 冠心病 心律失常患者常见上述证候者 其药物代谢产物研究国内外未见文献报道 本文首 1 13 次采用高效液相色谱-质谱法和 H-NMR C-NMR UV 等方法 对大鼠灌胃 CVB-D 后收集的胆汁 尿液及粪便进行代谢产物的研究 分离并鉴定了相应的代谢产物 实 验 部 分 1 材料与仪器 1.1 药品与试剂 环维黄杨星D 灌胃给药样品 南京小营制药厂提供 经HPLC 法检测含量98.5% 经HPLC-MS 检测纯度为99% 甲醇为色谱纯 水为高纯水 其他试剂为分析纯 硅胶 柱层析用 100-200 目 青岛海洋化工厂生产 1.2 动物 Sprague-Dawley 大鼠 ,体重 180 220g 由南京中医药大学实验动物中心提供,动物许 可证 SYXK苏 2002-0053 1.3 仪器 LC-DAD- ESI-TOF 联用系统 Waters 2690 液相色谱仪 Waters 996 二极管阵列检测器 美国Waters 公司 MarinerTM 5140 质谱仪 美国 Applied Biosystem 公司 电喷雾离子化接口飞行时间质谱检 测器 质谱工作站 MarinerTM 工作站 4.0 版 制备液相色谱 Waters 600E 四元扩展泵 Waters 2487 可变波长紫外吸收检测器 Millinnum32 色 谱管理系统 1 NMR 用Bruker ARX-500 型核磁共振光谱仪测定 CDCl 为溶剂 EI-MS 用英国VG 公司质谱 3 仪 UV 用Shimadzu UV-2401pc 紫外可见分光光度计 甲醇为溶剂 2 方法与结果 2.1 给药方案及样品的采集 取 Sprague-Dawley 大鼠 6 只 分别置于大鼠代谢笼中 收集空白尿液 空白粪便作对照 ig 10mg kg- 1 环维黄杨星D 溶液 收集24h 内尿液 粪便 取 Sprague-Dawley 大鼠6 只 体重220g 250g 做胆管插管手术 进行胆汁引流 收集空白 胆汁1ml 后 ig 10mg kg- 1 环维黄杨星D 溶液 收集12h 内的胆汁 2.2 LC-MS 分析条件 色