玻璃化法超低温保存马铃薯茎尖的研讨.pdfVIP

玻璃化法超低温保存马铃薯茎尖的研究 胡家金L2，邹剑锋2，熊兴耀2，刘志敏2，刘明月2 (1．湖南农业大学生物科学与技术学院，长沙，410128； 2．湖南农业大学园艺园林学院，长沙，410128) mill左右的马 摘要：采用玻璃化法对马铃薯离体茎尖进行了超低温保存的研究；选取10 铃薯试管苗茎尖在合5％二甲基亚砜的培养基上预培养2～3d，切取2～3mm长的茎尖，室温下 用60％玻璃化溶液2(PVS2)处理20～30min，再用PVS2于O℃下处理30min，换新鲜的 mol／L蔗糖培 h后取出，在40℃水浴中迅速解冻，再用1．2 PVS2，迅速投入到液氮中保存，24 GA3+1．5 6一BA+0．05NAA的Ms培养基上，25℃ 养基洗涤2次，接种于舍O．5mg／L mg／L ms／L 暗培养l周后转入光下培养，成活率达57．2％。 关键词：马铃薯；茎尖；玻璃化法；超低温保存 马铃薯是世界四大粮食作物之一，其产量仅次于玉米、水稻和小麦。马铃薯既可作粮 食、蔬菜、饲料，又是食品加工的一种重要原料作物，可以加工成淀粉、膨化食品、粉丝 等营养方便食品。由于马铃薯是无性繁殖作物，尽管它本身通过有性繁殖可以产生实生种 子，但由于其高度杂合分离，既不能作为种质加以保存，也不能直接用于生产。因而，生 产上一直采取田间种植、自然采收和贮藏的方式，利用田间薯块进行种质保存和繁殖，但 由于其繁殖器官体积大，含水量高，在贮藏过程中易发芽，这样不仅要花费大量的人力、 物力，占用一定面积的土地资源，而且由于连年田间种植和冬贮，导致各种病虫害不断侵 染和病毒积累，使品种不断退化，产量和品质逐年降低，甚至失去利用价值。近年来发展 较快的玻璃化冻存法是一种比较理想的植物种质资源保存方法，目前应用这种方法已成功 地保存了甘薯等10种无性繁殖植物。但有关马铃薯茎尖的超低温保存的报道还很少。本 实验研究了马铃薯茎尖玻璃化超低温保存的条件，以期建立马铃薯茎尖的超低温保存体 系，为长期稳定保存马铃薯种质资源提供技术支持。 1 材料与方法 1．1材料 6-BA+0．05 马铃薯品种为“Keswick”，取在继代培养基(MS+0．5mg／LGA3+1．5mg／L mg／ LNAA+100 CCC)上培养3周左右生长健壮的试管苗作为实验材料。 mg／L 1．2方法 1．2．1预培养 选取继代培养3周左右生长健壮的马铃薯茎尖(长约10～15mm)，于Ms+5％二甲基亚 基金项目：湖南省教育厅项目[03C6131 作者简介：胡家金(1966一)，男，博士，副教授，研究方向为植物生物技术。 一186— d 不同处理。 1．2．2颓处理 把经过预培养后的茎尖在解剖镜下剥取含有1～2个叶原基、长约1～3mm的茎尖， mol／L 转移到1．8mL的冷冻管中，每管lO个茎尖，在室温下用60％的玻璃化溶液(0．15 的蔗糖液体培养基与由PVS2溶液，即(30％甘油，15％乙二醇，15％二甲基亚砜， 。 30．’40、’50、60min。 。 1．2．3’玻璃化溶液处理和冰冻处理 ，， 经过以上处理后的茎尖，再用PVS2于0℃下处理不同时间(设时