甘肃野生酵母菌株的鉴定及抗性评价研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四斑套国炭酵工程学术讨论套论文集 甘肃野生酵母菌株的鉴定及抗性评价 谢荣1，王庆国2，刘建民2，陆璐1，刘天明2 (1．甘肃农业太学袁学院，兰州730070，2．山东轻工业学院食品与生暂工程学院．济南$50100) rDNA 摘要：呆用国际通用形态和生理生化鉴定方法厦26S DI／D2区序列分析对甘肃部 分县市的17份土样中分离到的29株野生酵母茁椿进行了鉴定．结果曼示t29株酵母可归 为10属18个种，其中中国新记录种7个，包括Williopsiscalifornica，Williopsiscaliforni- c4wr．dlmennae，Cryptococcus fermentati， occidEntali8-Pichia Hanseniaspora pljperl．同时对这29株酵母进行了抗性评价． 关键词：野生酵母I鉴定，抗性 酵母菌分布广泛，大多应用于工业生产，如食品、酒精、酶等行业。在我国，对酵母苗 资源的开发利用大多集中在东部沿海地区，对西北地区的菌种资源研究较少[1“】。甘肃 地处黄河上游，紧邻东部季风区、西接西北干旱区和青藏高原区。地貌复杂多样，70％的 地域为山地高原，还有少数戈壁沙漠，山多林少，干旱少雨，生态脆弱。这些特点都显示 了甘肃可能会有独特的野生酵母资源。本文通过采集甘肃各县市果(菜)园土样进行分 离和鉴定，筛选抗性较好的菌株，如耐高温、耐高糖、耐高渗，为菌种改良提供物质基础。 酵母菌现有95个属，700多个种[“。经典的酵母分类鉴定主要依赖于形态及生理生 化特性指标，然而，这些特征均是表型性状，且会随着环境的变化而有所改变，造成苗株 rDNA 鉴定结果的不稳定。随着分子生物学技术的发展，目前大多数种都可运用26S D1／D2区序列分析鉴定出来”]。 本研究重点测定了26SrDNADl／D2区的碱基序列，通过与网上模式菌 株比较，并结合形态和生理生化性状，以确定各个菌株的归属。 1材料与方法 1．1土样来源 供试土样2005年8月下旬采自敦煌孟家桥，天水秦城、秦安、甘谷，兰州城关、红古、 西固，平凉四十里铺、宠信，张掖临泽，白银靖远、景泰，武威四坎，嘉峪关文殊等地果(菜) 园耕作层土17份，共分离野生酵母菌49株。 1．2主要培养基和试剂 养基、玉米粉琼脂培养基、糖发酵基础培养基掣叮。分子试剂均购自Takara公司。26S 基盘项目：山东省自然基金项目(Y2005DIS)资助 10 第四次全国发酵工程学术讨论会 rDNA TATCAATAAGCGGAGGAAAAG D1／D2区PCR扩增引物NLl：5’一GCA CCGTGTTTCAAGACG 一3’，NL4：5--GGT G一亨由上海生工公司合成。 1．3方法 1．3．1酵母菌的分离 取5克待分离土样子无菌条件下加入盛有50ml富集培养基的三角瓶中，摇床培养 板上涂布并培养48小时，挑取形态不同的菌落，划线纯化3次以上，最后挑单菌落保藏 于一40℃甘油管中。 1．3．2 酵母菌的鉴定 Yeasts，aTaxonomic 供试菌株形态学观察及生理生化鉴定参照：The Study…及 ×PCRBuffer 2pl，Taq rDNA 所有菌株的测序结果已提交GenBank库。用供