辣椒素生物合成途径基因pal克隆及原核表达分析.pdfVIP

第4l卷 第5期 东 北 农 业 大 学 学 报 41f5)：66-7l 2010年 5月 JournalofNortheastAgriculturalUniversity May2010 辣椒素生物合成途径基因pal克隆及原核表达分析 郭庆勋 ，阮文渊 ，怀凤涛 ，郝宏智 (1．吉林大学植物科学学院，长春 130062；2．东北农业大学园艺学院，哈尔滨 150030) 摘 要：以辣椒品种 “益都红”胎座RNA反转录的cDNA为模板，根据p 基因保守序列设计引物，PCR扩增 得到 1条全长2157bp的 目的片段。该基因包含有完整的开放阅读框架，编码718个氨基酸，预测的分子质量为 73ku。与多种植物PAL的氨基酸序列有一定的同源性 ，其中与同科同属植物朝天椒的同源性最高。应用分子克 隆的方法成功地构建了pET一32a～pa1重组表达质粒，优化得到诱导表达的最佳条件为：IPTG0．3mmol·L～，温度 28℃，时间6h，经SDS—PAGE检测6xHis—PAL在E．coli中得到了高效表达，重组蛋 白分子质量约为93ku。因 此，该基因的克隆与原核表达为深入研究辣椒PAL的基因结构、生物活性、表达调控机制以及辣椒素的生物合成 机制奠定了重要基础。 关键词：辣椒素；苯丙氨酸解氨酶(PAL)；原核表达 中图分类号：Q785；Q786 文献标志码：A 文章编号：1005—9369(2010)05—0066—06 Cloningandprokaryoticexpressionofpalgenereferringtothepathwayof pungencybiosynthesisofCapsicumannuum／GuoQingxun1，RUANWenyuan1，HUAI Fengtao2,HAOHongzhi’(1．CollegeofPlantSciences，JilinUniversity，Changchun130062，China； 2．CollegeofHorticulture，NortheastAgriculturalUniversiyt，Harbin150030，China) Abstract：A targetfragmentwithafulllengthof2 157bpwasamplifiedwithcDNA ofCapsicum annuum placenta asthe templates andthe conservativesequencesofpalgeneas the primers．This sequencehadafullopenreadingframe，encoding718aminoacids．Putativeproteinwasabout73kuin molecularweight．Theputativeproteinsharedhighidentityto otherhomologues，especiallyCapsicum chinses．In the experiments。a recombinantplasmid pET-32a—palwas constructed．This recombinant prokaryoticexpressionvector(pET·32a—pa1)wasusedtotransformE．coliBL21(DE3)．SDSanalysis confirmed thatthe recombinant6X His—PAL with the predicted molecularweightofabout93 ku was successfullyexpressedinE．cofiBL21(DE3)strainwiththeoptimalcondition：0．3mmol·L—IPTG，28oC， shaking6h．Accordingly，thecloningandprokaryoticexpressionofpalgeneofCapsicum annuum isthe