苦瓜籽核糖体失活蛋白的分离纯化及对细胞抑制活性的研讨.pdfVIP

丫 672484 苦瓜籽核糖体失活蛋白的分离纯化及对细胞抑制活性 的研究 中文摘要 研究人员已从苦瓜籽中分离出包括a-Momorcharin(a-MMC),R-MMC,7 一MMC,8-MMC,E-MMC和MAP30等6种苦瓜素。苦瓜素具有抑制兔网织红细胞 裂解液中蛋白质合成的活性，其半数抑制浓度工C50为。01^-10.Onm。其中，a -mmc和p-MMC的抑制活性强，其工C50分别为。23nM和0.19nM，且在苦瓜籽 中的含量丰富。 本研究利用。-mmc和p-mmc的高等电点特性，首先在色谱工作站上让苦瓜 籽粗提液流过弱阴离子DEAE-650C与弱阳离子CM-650M串联交换柱，然后对 CM-650M柱进行低梯度缓慢洗脱，得到纯化的“-MMC和p-MMC;发现。-MMC对 香蕉枯萎菌和果腐霉菌、0-MMC对果腐霉菌均具有较强的抑制活性;研究了a -mmc和p-mmc对细胞的抑制活性，结果表明a-MMC和p-MMC对人肝癌细胞 Bel-7402的半数抑制浓度IC50分别为0.073mg/mL和0.033mg/mL，对人脐静脉 内皮细胞Hunec的半数抑制浓度IC50分别为0.074mg/mL和0.036mg/mL，可知R -mmc对细胞的抑制活性要比a-MMC强;给R-MMC偶联上抗肝癌单克隆抗体 HAbl8Fcab)2后，生成免疫毒素p-HAbl8F(ab)z，其对Bel-7402的半数 抑制浓度IC50为1.21X10-0emol/L，比p-mmc对Bel-7402的半数抑制浓度1.10 X10emol/L略高;免疫毒素对Hune。的半数抑制浓度IC50为7.42X10-0mo1/L, 是p-MMC对Hunec的半数抑制浓度1.20X10-mol/L的61.8倍，表明p-MMC偶 联上抗肝癌单克隆抗体片段HA618F(ab)z后具有靶向作用的功能。 本研究探讨了利用苦瓜籽核糖体失活蛋白p-mc来研制靶向抗肿瘤药物的 可能性，同时也为用阴阳离子交换串联色谱分离纯化碱性或酸性蛋白探索了一条 新的技术路线。 关键词:苦瓜籽，核糖体失活蛋白，串联色谱，免疫毒素，靶向治疗 IsolationandPurificationofRibosome-inactivating Proteins(RIPs)fromBitterMelonSeedsand ActivityAssayofa一MMC,(3一MMCand ImmunotoxinContainingp一MMC Abstract Researchershadpurifiedouta一MMC,P-MMC,y一MMC,5一MMC,。 一MMCandMAP30rfombittermelonseedsandtheseRIPsshowed outinhibitory activitiesofproteinsynthesisinrabbitreticulocytelysateandtheirIC50wasrfom 0.01nMtoINN.IC50ofa-MMCandp-MMCwas0.23nMand0.19nMamong them.Thisillusminateda-MMCandp-MMChadhighinhibitoryactivity.We connectedanionexchangecbromatograpycolumn(DEAE-650C)andcationexchange chromatographycolumn (CM-650M)inseriesonperfusioncharomatography workstationtoisolateandpurifya-MMCandR-MMConthebaseoftheirhighpl. OurwantedproteinspenetratedoutofDEAE-650Cfirstlyandelutedoutof CM-650Mthroughslowsaltgrads.a一MMCandp-MMCinhibitedsomebacteria, suchasMicrozymeandStaph.aureus.Weresearcheda一MMCand3(一MM