肺鳞癌组织中及患者尿中糖胺多糖含量及其硫酸化特点研讨.pdfVIP

吉林省第四届科学技术学术年会 1103 肺鳞癌组织中及患者尿中糖胺多糖 含量及其硫酸化特点研究 戚良晨· 许 侃2 (1吉林大学中日联谊医院；2吉林大学第一医院长春130021) 摘 要：目的：探讨组织中糖胺多糖与肿瘤发生的关系。方法：应用自行提纯的硫酸软骨素裂解酶和高 效液相色谱(HPLC)=糖分析方法，从细胞外基质代谢的疾病生物化学角度，对肺癌患者的病变组织及体 液糖胺多糖(GAG)进行了组分和性质的研究。结果：表明肺癌患者组织GAG总量明显高于癌旁的非癌组 糖中非硫酸化二糖(ADi—os)含量高于健康对照组15倍。结论：细胞外基质GAG并非仅起单纯的支持和 保护作用，还与细胞分化、增殖及其代谢调节等多种生理功能有关，GAG代谢异常与肿瘤的发生、发展过 、 程密切相关。 关键词：糖胺多糖肺癌 细胞外基质 体内糖胺多糖(GAG)主要以与核心蛋白形成高分子的蛋白多糖(PG)形式存在于组织中，它是细胞外基 质、基底膜和细胞表面的重要结构成分。细胞增殖、分化、粘附、迁移等多种功能与PG或GAG密切相关， PG或GAG含量或性质发生改变时，将直接影响细胞、组织代谢，进而导致生理功能发生障碍，或出现病 理改变【11。作者从病变组织和体液GAG含量、种类及GAG分子的硫酸化程度，研究了肺癌组织GAG代谢 特点。 1材料和方法 1．1试剂和仪器 木瓜蛋白酶(美国Fein公司)，胰蛋白酶(新疆伊犁肉联厂生化制药厂)，咔唑(日本武田化学制药公司)， 硫酸(北京第二化学试剂厂)，硫酸软骨素裂解酶ABC(自行制备)圆，不饱和二糖标准品(日本生化学工业株 式会社)，其它化学试剂均为国产(AR级)。KR2000T低温高速离心机(日本久保田)，722型分光光度计(上海 分析仪器厂)，岛津LC6A型高度液相色谱仪，台式高速离心机TCL-I(I-_海医疗器械六厂)。 1．2样品来源 1．2．1正常肺组织 取急死尸检材料(15例)，均为男性，年龄在30～40岁之间。 1．2；2肿瘤组织及癌旁非癌组织 取吉林大学中日联谊医院经临床和病理诊断为肺癌的手术患者(鳞癌)15例，手术中取下肿瘤组织及 癌周围的非癌组织。样品置一20℃冰箱中保存备用。 1．2．3尿液来源 收集未经治疗的肺癌患者24h尿液30例．以相应性别和年龄的健康人24h尿液30例作对照。 1．3 组织中GAG的提取 1104 增强自主创新能力 促进吉林经济发展 弃上清，沉渣中即为GAG。 1．4尿GAG提取 液40ml，4C放置12小时，离一L,(135009、4℃、15min)弃上清，沉渣中即为GAG。 1．5 GAG总量测定 按Biher改良的Dish法定量GAG。 1．6 GAG的酶解 (HPLC)分析。 1．7 GAG酶解产物的HPLC分析 值，计算其含量。 2 结果 2．1 肿瘤组织GAG总量增加 肿瘤组织和肿瘤周围组织(肿瘤边缘3．0cm以内，在外观上属正常的非癌组织的GAG测定，结果：正 重。肺癌组织比癌周组织GAG浓度明显增高(PO．01)，而且在向正常组织过渡过程中呈递降关系。 2．2 将肿瘤组织和肿瘤周围组织GAG进行酶解。然后应用HPLC方法对GAG二糖组分进行定量分析 结果：数值单位为：峰面积×10．5。 肺癌组织中hDi一0S均明显高于非癌组织(P0．01)。 肺癌组织中硫酸化二糖单位明显高于非癌组织，但癌周组织的硫酸化程度低于正常肺组织。此结果 与癌组织中GAG含量高于癌周组织一致。 从硫酸化二糖与非硫酸化二糖含量比值看：癌组织中GAG分子硫酸化程度明显高于癌周组织和正常 肺组织，表明在癌变过程中基质GAG的硫酸化程度加大。 癌周组织的代谢也不正常，其GAG硫酸化程度严重不足，甚至低于对照组，这一现象值得进一步研 究。 织的高硫酸化发生于糖的4位和6位羟基，但6位羟基的硫酸化程度又明显高于4位羟基。 2．3 肺癌患者尿中GAG及其裂解后二糖组分的改变 结果：数值单位为：峰面积×10-5。 正常人：GAG=9．54±5．93 “ 2