蓝藻基因工程制备防治对虾白斑综合症药物的研讨.pdfVIP

藕建IH 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 蓝藻基因工程制备防治对虾白斑综合症药物的研究 邓元告1施定基2张春莉2宋东辉1赵兴贵1张越男1 (1．天津科技大学海洋科学和工程学院，天津300457 2．中国科学院植物研究所光合研究中心，北京100093) 1对虾白斑综合症的危害及研究历史 对虾白斑综合症病毒(white virus，简称WSSV)，是目前对虾养殖业中危害 spotsyndrom 最严重的病毒之一，能感染几乎所有的虾类、蟹、螯虾等甲壳动物，该病毒的主要传播途径 是通过摄食从u进入体内，并进行全身性感染。感染后标志性的病理症状为皮下、甲壳及附 肢出现白色斑点，WSSV具有很高的侵染性和复制能力，可广泛感染对虾的皮下组织(包括 甲壳下上皮、胃上皮、后肠上皮、鳃等)、造血组织、结缔组织、触角腺、血．淋巴等组织细 胞。从90‘F代初发现该病毒以来，已遍及亚洲主要对虾养殖国家和地lx：，并传播到北美和 中南美，给养殖造成巨大的损失。1993年来，自斑综合症病毒引发我国大面积爆发对虾病毒 性疾病，流行广，致死快，3．10天致死率为100％：1999年，对虾白斑病给巴拿马的对虾养 殖业带来了灭顶之灾，90％的养虾厂倒闭，数千人失业，经济损失达1亿美元。 对虾病毒病是海水养殖中危害最严重的疾病之一，也是制约海洋生态和海水养殖发展的 瓶颈问题之一。目前，对虾白斑综合症一直没有一种完全有效的防治办式。 近10年来，对虾向斑病毒分子生物学研究方面取得了一定的进展。Chang等(1996)、 宿上范围，DNA复制和形态发生做了报道，从分子水平开始对对虾白斑病毒的感染和致病机 理进行了研究。1999年中美学者合作首次完成了它基因组305kb的全序列测定。这项由徐洵 Hulten等(2001) 院七j二持的研究，评为当年的中国十大科技进展之一【徐洵等(1999)、Van 和Tsai MF等(2002)1。中幽科学院植物研究所与黄海研究所、中科院海洋所合作在国内外 首次把对虾自斑病毒的VP-28基测转入蓝藻表达成功(张春莉等2003)。 2对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP28及其在该病防治中的重大意义 白斑杆状病毒(wSSV)是感染对虾和甲壳类动物的大DNA病毒。病毒粒子至少包括5 的基冈可能是从同一祖先基测进化jfd来。目前还不能完全确定WSSV系统感染和进入对虾的 方式，以及在这些过程中这些蛋白的作用。 对丁．．一些病毒来说，结构蛋自如外壳蛋白在感染其宿主中起到关键的作用。2000年， Burton等报道病毒囊膜上的突起和其抗体结合，阻lI：病毒吸附在细胞表面，进入细胞，或病 389 福建lr】 第三届海洋生物高技术抡坛 2005．08．J9．23 毒脱壳。Van 在对虾全身感染中赢接起作用。 3利用蓝藻基因工程制备对虾白斑综合症口服疫苗 蓝藻(又称为蓝细菌或蓝绿藻)，是一群种类繁多，分布广泛，能进行放氧光合作用的原 核生物，其生长速度快，培养成本低，能规模培养，通常不含内毒素，含蛋白酶较少，产物 不彤成包含体等优点，是表达外源基闪的优良宿主之一，如果利用蓝藻基因工程制备口服剂， 可简化下游T艺，还可进行光反应器规模培养。然而，用蓝藻表达外源基因还存在表达效率 较低等问题。外源基因在蓝藻中表达80年代中期才成功，几十年来国内外在蓝藻种表达的 外源基因约有几十个，其中具有应用前景的有20多个，如解氯基因、肿瘤坏死闳子基因、 表皮生长恻子基因等，土要用二Ji处理环境污染和制备重组药物。1988年中国科学院植物研究 所开始了蓝藻分子生物学和基凶工程的研究，在蓝藻中表达成功了12个外源基因，至今是 幽内连续成功的在蓝藻中表达外源基因的唯一研究集体，也是国际上用蓝藻作宿主表达外源 基凶最多的研究集体。 Beachy等(1986)发现，经遗传转化的植物产生对病毒抗性。这一发现，已广泛应用于 植物病毒的预防