补料培养在猪链球菌疫苗生产中的应用研究.pdfVIP

补料培养在猪链球菌疫苗生产 中的应用 付 强 。，程立坤。，苗立中 ，何军柱。，沈志强 ，韩文瑜 (1。吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春 130062；2．山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州 256600； 3．山东绿都生物科技有限公司，山东滨州 256600) 摘 要：为了优化猪败血性链球菌弱毒株 (ST171)活疫苗的生产工艺，考察不 同培养方法对链球菌主要 代谢副产物乳酸、活菌数的稳定性以及冻干率的影响，采用批培养、恒速补料及溶氧反馈补料的三种培养策 略。结果显示，试验条件下补料培养模式不能降低代谢副产物乳酸的生成量，但恒速补料培养方式能延长活 菌数的稳定期 ，三种培养方式在 6h时收获茵液冻干率最高，随培养时间延长，冻干率均降低。应用恒速流 加方式进行猪链球菌疫苗生产时，茵体密度、活茵数及冻干率均最高。 关键词 ：猪链球菌；培养方式；发酵 ；乳酸 中图分类号：TQ920．62 文献标识码 ：B 文章编号：1007-5038(2013)03—0133—04 在发酵工业 中，为 了提高产量 ，补料一分批培养 马丁肉汤溶解后 ，接种至一个鲜血马丁琼脂平板上 (fed—batchculture)在食 品和医药工业 中的应用越 37℃培养 22h。选取光滑、黏稠、圆形露珠状菌落若 来越广泛口]，其优势在于可以解除底物抑制、产物反 干混合传代一个鲜血马丁琼脂平板，37℃培养 22h。 馈抑制和葡萄糖分解阻遏效应 。 1．2．2 种子培养 用缓冲肉汤培养基洗下马丁琼 在猪败血性链球菌活疫苗 的发酵培养研究方 脂平板上的菌落 ，分别接种于 100mL缓冲肉汤中， 面 ，采用分批培养方式[2]，菌数一般 6O亿左右，超时 并加入 20mL／L猪血清 ，摇匀 ，置 37℃恒温培养8h 培养活菌数明显降低 ，同时发现主要代谢副产物乳 后冷藏保存 。 酸明显抑制后期菌数的提高_3]。本试验采用补料一 1。2．3 发酵培养 分批培养策略，设计恒速流加和溶氧反馈两种培养 1．2．3．1 分批培养模式 将培养 8h的种子液按 模式 ，以分批培养为对照，考察在不 同培养条件下乳 20mL／L接种量接种于发酵培养基中，同时添加 20 酸含量的变化和活菌数稳定性以及最终冻干率 的变 mL／L猪血清和 20g／L葡萄糖溶液 ，37℃培养 ，初 化 。 始搅拌转速 100r／min，通过 自动流加 4mol／L 1 材料与方法 NaOH溶液控制pH在7．4，调节搅拌转速和通气量 1．1 材料 保持溶氧在 30 ～5O％，每隔 1h按照无菌操作取 1．1．1 菌株 猪链球菌弱毒 ST171株 ，由山 样检测残糖 、乳酸和吸光度变化 ，对 6、7、8h的样 品 东绿都生物科技有限公司提供。 做活菌计数 。 1．1．2 仪器设备 GUJS-10C型发酵罐 ，镇江东方 1．2．3．2 恒速流加培养模式 将培养 8h的种子 生物工程有限公司产品；TU一1810紫外可见分光光 液按 20mL／L接种量接种于发酵培养基 中，37℃培 度计 ，北京普析通用仪器有 限责任公司产 品；SBA一 养 ，初始搅拌转速 100r／min，从培养后 3h开始流 40C型乳酸葡萄糖分析仪 ，山东省科学院生物研究 加 500g／L葡萄糖 ，流速 16mL／h，在溶氧上升时流 所产品。 速增加为 37mL／h，共培养 8h结束，通过 自动流加 1．1．3 培养基 改 良缓冲 肉汤，按 《中华人 民共和 4mol／LNaOH溶液控制 pH在 7．4，调节搅拌转速 国兽用生物制品规程 2000版》制备。500g／L葡萄 和通气量保持溶氧在 3O ～5O ，每隔 1h按照无 糖溶液 ，116℃灭菌 30rain。 菌操作取样检测残糖 、