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;第六章 植物基因工程（上）;转基因植物;一、植物的转基因技术;1939年white和Gatheret用实验方法培养植物组织和器官以来，经过不断的发展，植物细胞和组织培养技术已经发展成为一门精细的实验科学。 植物的体细胞具有全能性：即单个细胞经过合适的培养，通过愈伤组织器官分化或体细胞胚胎分化途径再生出完整的植株。 一般先通过植物激素等调节、诱导植物细胞进行分裂，获得再生的愈伤组织，通过激素诱导可获得再生的植株。;（一）植物细胞培养技术;（三）转基因的受体系统;1. 植物组织受体系统;2. 植物细胞原生质体系统;2. 植物细胞原生质体系统;3. 生殖细胞受体系统;4. 叶绿体转化系统;（四）外源基因导入植物的方法;DNA直接转移法;A. 化学刺激法;在适当的外加电压下，细胞膜可能被击穿，但不影响或很少影响细胞质的生命活动，移去外加电压后，膜孔在一定时间内可以自动恢复，细胞膜这种可逆性的变化使得溶液中的大分子物质（DNA）进入细胞。 可逆击穿的临界电压、脉冲时间长度、温度、PEG 的浓度和处理时间、细胞类型等都影响到转化的频率。;在适当的外加电压下，细胞膜可能被击穿，但不影响或很少影响细胞质的生命活动，移去外加电压后，膜孔在一定时间内可以自动恢复，细胞膜这种可逆性的变化使得溶液中的大分子物质（DNA）进入细胞。 可逆击穿的临界电压、脉冲时间长度、温度、PEG 的浓度和处理时间、细胞类型等都影响到转化的频率。;D. 基因枪法;D. 基因枪法;E. 脂质体介导法;F. 微激光束法;G. 花粉通道法法;载体介导法;A. 农杆菌介导法;A. 农杆菌介导法;Ori区：控制质粒的自我复制;T-DNA的长度在12-24kb间，在其5’及3’端都有真核表达信号，如TATA box、poly(A)信号等。 T-DNA 的两端边界为25bp的重复序列，分别称为左边界和右边界，其中右边界在T-DNA 的转移中起重要的作用。 目前已发现了5或8种不同的Vir基因，如VirA、VirB、VirC、VirD、VirG 等。;1）将目的基因DNA与Ti质粒构建重组的质粒分子； 2）将重组载体分子转化大肠杆菌； 3）通过细菌结合作用使携带外源DNA的重组质粒从大肠杆菌转移到根瘤土壤杆菌，外源DNA转移到Ti质粒上； 4）将根瘤土壤???菌接种至植物伤口部位，或用原生质体共培养方法转化植物细胞； 5）经过愈伤组织或原生质体培养，再生出转基因植株。;A. 农杆菌介导法;A. 农杆菌介导法;B. 植物病毒DNA介导法;（1）单链RNA病毒：90％具有感染力的正链RNA（mRNA)； （2）双链DNA病毒：花椰菜花病毒组是唯一的一群以双链DNA作为遗传物质的病毒，寄主范围狭窄； （3）单链DNA病毒。;二、转基因植物的筛选与检测;（一）报告基因;2. 显色或发光报告基因： 1). 大肠杆菌的α－葡萄糖苷酸酶（GUS）: 该酶在脊椎动物和微生物中表达，植物细胞中几乎不表达。当gus基因转入植物细胞内表达时，若与X－葡萄糖苷酸（X-gluc，与X-gal相似）保温后，就会产生蓝色反应，借此可以得知报告基因的表达程度，但是该酶不能分泌在细胞外，因此在测定酶活时，须将细胞杀死，破碎。 2). 昆虫的荧光素酶基因： 将昆虫荧光素和ATP表达荧光素酶的植物细胞混合，该酶催化昆虫荧光素的氧化反应，并生成AMP、CO2和光，表达该酶的植物细胞或组织便可用感光胶片检测。 ;（一）报告基因;（二）分子生物学检测方法