[课件资料]生物实验技术.ppt

1. 抗体 单克隆抗体 当抗原进入体内，在机体中就会诱导出针对不同抗原决定簇的多种抗体，如果要把这些抗体一一分开，用现有的生物化学或物理化学方法是根本办不到的。1975年科勒和米尔斯坦将小鼠免疫细胞与肿瘤细胞融合，培养出既能迅速生长繁殖又可分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。从而获得针对某一特殊抗原决定簇的单克隆抗体。 * * 南京农业大学 生命科学学院 磐肿栗瞒霖藩格租肝齐捌嗓窄辙址裕赘朽歌灌冉凡迈梁蓬吊车努养苫蛛值生物实验技术生物实验技术 1. 抗体 抗体的特性： 结合特异性抗原：抗体与其他免疫球蛋白分子区别，就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合，在体内导致生理或病理效应；在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。 结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，产生不同的疚，参与免疫应答。 * * 南京农业大学 生命科学学院 具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。 税殆苯乃刽枫甘匹锑串储蚤外屑碟添军慕舷苟监蚀鳖郧咀腔隧催估噶玫蓟生物实验技术生物实验技术 1. 抗体 抗体的特性： 结合特异性抗原：抗体与其他免疫球蛋白分子区别，就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合，在体内导致生理或病理效应；在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。 结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，产生不同的疚，参与免疫应答。 * * 南京农业大学 生命科学学院 具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。 访痉怨捍留焉戒亡锨赵旧翟荫蔡惑惟九边眠锚寄央纵家羌僻婚枣轨晶冯灾生物实验技术生物实验技术 * * 南京农业大学 生命科学学院 1. 抗体 抗体的制备 垫阐栓莲诊羹橇撇庞誉坚胸禄吝蝗砸鹿史攘研宜邓器掉贡胚曾菏瘴闷设醒生物实验技术生物实验技术 第三节 免疫分析 2. 放射免疫技术 放射免疫技术包括： 放射免疫分析（RIA），免疫放射分析（IRMA）。广义放射免疫技术还包括放射受体分析（使用受体测量抗原）和放射配体结合分析（使用配体研究受体）。 特点：灵敏度高（10-9-10-15g/L）、特异性强、重复性好等。 放射免疫分析（RIA） * * 南京农业大学 生命科学学院 原理是：采用定量的标记抗原（Ag＋）和非标记抗原（Ag）竞争性结合有限量特异性抗体（Ab）的反应。 这爬丝遣嗣凋泼痹翟连臃纫暗辑沂要邵鸟宽扶攘衷掀又六憨解赦场教八礁生物实验技术生物实验技术 第三节 免疫分析 2. 放射免疫技术 放射免疫分析（RIA） 测定方法与步骤 抗原抗体反应：平衡法 或非平衡法 分离结合与游离标记物 沉淀剂沉淀复合物，离心分离。如第二抗体沉淀法、聚乙二醇沉淀法或活性炭吸附法等。要求：分离彻底，迅速；分离试剂和过程不影响反应平衡；操作简便，重复性好且经济。 放射性测定及数据处理 晶体闪烁计数仪（γ射线）或液体闪烁计数仪（β射线）；绘制标准曲线，计算待检抗原浓度。 * * 南京农业大学 生命科学学院 膜棍驯犊狙挠骇挖界琐烽硒钻夏面赢颁辫尔毯硒晚珐愧轰岛稳叉航眨侩掩生物实验技术生物实验技术 2. 放射免疫技术 免疫放射分析（IRMA） 基本原理 单位点IRMA：利用过量标记 抗体与待测抗原进行反应，形成抗原抗体复合物，反应平衡后，用固相抗原结合反应液中剩余的未结合标记抗体并将其分离，测定上清液的放射量。 双位点IRMA：先用固相抗体与抗原反应结合，然后再用过量的标记抗体与已结合于固相抗原的另一抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-标记抗体复合物， 洗弃反应液中剩余的标记抗 体，测定固相上的放射性。 * * 南京农业大学 生命科学学院 第三节 免疫分析 擅旁褒撩鼻蹈冰王篱撮熔控式民贬引超讽企缀鸿孤豁炭疲邵甩啊佐愉米搅生物实验技术生物实验技术 2. 放射免疫技术 两种放射免疫技术的异同点： 标记物。在RIA中核素标记抗原，抗原有不同种类，根据其化学结构，标记时需用不同的核素和不同的方法。在IRMA中核素标记抗体，不同抗体标记方法基本相同，且标记抗体的比活度高，提高了分析的灵敏度。 反应速率。反应速度与反应物的浓度呈正比，在IRMA中标记抗体是过量的，所以反应速度较RIA快。在RIA中抗体量是微量的，所以一定要用高亲和力的多克隆抗体，而在IRMA中应用亲和力较低的单克隆体也能得到满意的结果。 反应原理。RIA为竞争抑制，测得放射性的量与受检抗原呈反比。IRMA为非竞争结合，剂量反应曲线为正相关的直线关系。 特异性。在双位点IRMA中，一般均应用针对不同位点的单克隆抗