除草放线菌的筛选与链霉菌52号化感活性物质的分离鉴定研究.pdf

摘 要 链霉菌属(Streptomyces)是土壤中最常见的放线菌，是生物界重要的 种质资源。作为大多数抗生素和一些重要活性物质的产生菌，链霉菌也 是开发天然除草活性物质的重要来源。本论文主要大量的从土壤中分离 放线菌，通过化感作用生物测定方法筛选出具有除草活性的菌种，并对 菌株的化感作用作了初步研究。 本研究从华南农业大学树木园、华南农业大学校园、广东省新兴县、 湖南省舜皇山国家森林公园等数处采集土样共35个，用吹土法在高氏一 号固体培养基上共分离出65株放线菌。这些菌株在高氏一号固体培养基 上呈圆形或近圆形，部分产色素，有5个菌株的菌落呈同心圆状。 对这65株放线菌菌株进行固体培养基生物活性测定发现26,27,30, 32,34,35明显抑制芝麻的生长，6号抑制红芜菜的生长，52号明显抑 制了油菜，芝麻、稗草幼苗的生长，均表现为抑制根的伸长。未见有抑 制受体种子发芽的放线菌菌株。 链霉菌 (Streptomycessp.)52(52号)菌丝体的各种极性的提取物对受 试植物都没有表现抑制作用，但其液体发酵液则表现出显著的抑制作用， 且这种抑制作用随着浓度的降低而减小。滤液稀释6倍后对油菜、芝麻 根长的抑制率分别为95.6%,97.4%，对油菜、芝麻苗高的抑制率分别为 91.9%,91.7%;稀释 10倍后，对油菜、芝麻地下部分的抑制率分别为 81.2%,92.1%，对地上部分的抑制率分别为68.70/x,82.0%。说明链霉菌 52对高等植物具有化感作用而且该菌株中的起主要作用的化感活性物质 全部或大多已释放到环境中。 对链霉菌52的发酵液用不同极性的溶剂萃取后作生物活性测定，正 丁醇萃取物对油菜、芝麻、稗草根长的抑制率分别为97,3%,94.7%,34.9%, 对其苗高的抑制率分别为92.9%,94.90/x,43.0%，乙酸乙酩萃取物对油 菜、芝麻地上部分的抑制率分别为16.0%,13.2%，对地下部分的抑制率 分别为25.0%,12.8%，对稗草没有抑制作用。二氯甲烷萃取物对以上三 种植物均未表现出抑制作用。结果表明，链霉菌52中的化感活性物质极 性较强，更易溶于正丁醇中，在二氯甲烷和乙酸乙酷萃取物中不含或含 量较少。 链霉菌52对受体的抑制作用主要表现为抑制根部生长，对油菜、芝 麻表现为种子萌发后根尖变黑，不能吸收养分，最后导致死亡或是生长 缓慢;对稗草表现为抑制须根的生长。 链霉菌52的发酵液用正丁醇萃取后用柱色谱分离，共分离到7个化 合物，其中利用四大波谱技术己鉴定两个，分别为邻苯二甲酸二正丁酷 和3,4’一二轻基黄酮。 性的放线菌，并对除草活性产生菌作了初步研究，为进一步开发微生物 源除草剂奠定了基础。 关键词:微生物源除草剂，化感作用，链霉菌，3,4一二经基黄酮 英 文 缩 写 词 表 ESI Eletronicsprayionization 电喷雾电离化质谱 GC-MSGaschromatography-mass 气相层析一质谱联用 IR Infraredspectroscopy 红外光谱 NMR Nuclear 核磁共振 HMQC Heteronuclearmultiple-quantumcoherence异核多量子相关 HSQC Heteronuclearsingle-quantumcoherence 异核单量子相关 Dimethylsulfoxide 氖代二甲亚矾 M S Massspectrum 质谱 R I Responseindices 化感作用响应指数 华 南 农 业 大 学 硕 士 学 位 论 文 1前言 化感作用 (Allelopathy)是指植物或微生物通过向周围环境释放化学 物质(次生代谢产物)从而直接或间接地抑制或促进邻近其它植物生长和 发育的现象(Rice