采用磁性载体制备的固定化酶反应器的载体粒径对蛋白质酶解性能的影响研究.pdf

第 2期 张 姣，等：采用磁性载体制备的固定化酶反应器的载体粒径对蛋白质酶解性能的影响 ·103· Key words： magnetic nanopa~icles； immobilized enzyme reactor； proteomics； protein digestion 蛋 白质组学作为一个多学科 的研究，集蛋 白质 次 ，呈现出静态分析向动态变化研究转变 、定性描述 及肽段分离技术 、质谱定性及定量分析技术和生物 向定量分析发展的新趋势。这些 皆基于对肽段进行 信息学于一体 ，对复杂多样 的蛋 白质的动态变化 、结 准确和可重复性的定量 ，进而达到对蛋 白质准确定 构功能及相互作用进行深入研究… 。在 目前蛋 白 量的目的。这也对蛋白质的完全酶解提出了更高的 质组学的研究 中，常用的鉴定方法主要为基于质谱 要求。理想的情况是在胰蛋 白酶酶解时蛋 白质应在 的 “鸟枪法 (shotgun)”：将 目标蛋 白质酶解后 ，采用 赖氨酸 (K)和精氨酸 (R)的羧基端进行酶解 。而实 多维液相色谱一质谱联用技术，对酶解生成的多肽混 际上 ，酶解过程存在不完全性 ，这就在一定程度上增 合物进行分离和质谱分析，并将所产生的数据与其 加 了样本 的复杂性 ，使实验结果产生偏差 。因 理论蛋白质数据库进行匹配 ，从而实现对蛋 白质的 此 ，在本实验中，通过表面引发原子转移 自由基聚合 鉴定 。由此可见 ，蛋 白质的规模化鉴定首先需要 反应 (ATRP) 进行链引发 ，在不 同粒径 的磁性 对样品进行酶解处理 ，因此高效快速 的蛋 白质酶解 纳米颗粒表面进行化学修饰 ，制备出粒径大小不 同 方法显得尤为重要 ，其酶解效率也将成为影响后续 的固定化酶反应器 (IMER)。深入考察并 比较 了在 蛋 白质组及其蛋白质序列深度覆盖 的重要一环 。 一 定程度上加大磁性颗粒 的粒径 ，对其团聚、酶解效 广泛使用的传统溶液酶解 ，存在需要较长 的酶解时 率和漏切位点等的影响。 间(通常需要过夜)、容易发生酶 的 自身酶解 、酶不 1 实验部分 能重复使用及酶 自身不能去除等一系列不足。因 此 ，近年来 ，固定化酶越来越受到人们 的青睐并得到 1．1 仪器与试剂 了快速 的发展 ，在生物工程、环境工程 、化学生物学 基质辅助激光解吸电离一飞行时间质谱仪 (4800 等领域发挥着重要作用 ’。在众多的固定化酶研 ProteomicsAnalyrzerMALDI—TOF MS，美 国 AB 究中采用的载体 同样具有多样性 ，如 ：纤维薄膜 、 Sciex公司)；毛细管高效液相色谱一电喷雾一线性离 功能化 二氧化硅 ’、玻璃 陶瓷 、磁性纳米 颗 子阱．傅里叶变换离子 回旋共振质谱仪 (HPLC-ESI— 粒 m 、介孔材料 “及杂化整体柱 等 。由于 LTQ．FTMS，美国ThermoFisherScientific公司)； 材料本身的性质 ，酶固定载体也都存在 自身的优缺 ThermoOrionMODEL818型 lCIH计 (美国Thermo 点。需考虑的主要方面有 ：其结构 的可调控性及对 公司)；ZipTip脱盐柱 (美国Promega公司)；Sar— 酶键合能力 的影响、传质性能及对酶活性的影响、材 toriusBP211d分析天平 (瑞士 Sartorius公司)；高 料的比表面积对负载量的影响、材料的可获得性及 速离心机 (美 国ThermoFisherScientific公司)；离 是否容易进行分离等 ¨。虽然磁性纳米颗粒本身 心浓缩仪 (美 国ThermoSavant公司)。 易氧化 、表面羟