嗅鞘细胞静脉移植治疗脊髓损伤的实验研讨.pdf

目 录 ’、 中文摘要……………………………………………．1 英文摘要……………………………………………．3 符号说明………………．：……………………………6 前 言………………………………………………．．7 材料和方法…………………………………………．．9 结 果……………………．…………………………．15 讨 论………………………………………………．．20 结 论………………………………………………．．30 附 图………………………………………………．．3l 参考文献……………………………………………．．36 综j丕…………………………………………………41 附 录…………………………………………………51 致 谢…………………………………………………．53 攻读学位期间发表的学术论文………………………………．．54 原创性声明………………………………………………55 嗅鞘细胞静脉移植治疗脊髓损伤的实验研究 研究生 吕听刚 导 师 魏丌斌 专 业 外科学(骨科) I ● ●—L—11’ 中又捅斐 cord 脊髓损伤(spinalinjury，SCI)后的神经再生及功能恢复一直是医学 cells，OECs) 界的难题，近年来在细胞移植中，嗅鞘细胞(olfactoryensheathing 以其独特的生物学特性和促进损伤脊髓轴突再生的作用成为最有前景的治 疗方法之一。目前嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的方式以局部移植治疗为主， 而以静脉移植治疗脊髓损伤的方式没有检索到相关的研究报道。 目的 探讨和研究嗅鞘细胞静脉移植治疗急性脊髓损伤的疗效(感觉运动功能 恢复、神经纤维再生情况等)及可能的作用机制，为临床上治疗急性脊髓损 伤提供一种简单易行的移植方法。 材料与方法 1．嗅鞘细胞的培养、纯化与鉴定： OECs的原代培养、纯化，消化收集嗅鞘细胞，并用双苯亚甲胺进行核标记。 2．脊髓半切损伤模型的制备、分组与移植治疗： 型随机分为嗅鞘细胞髓内局部移植组(A组)、嗅鞘细胞静脉移植组(B组)、 D／F12静脉移植组(C组)和空白对照组(D组)。 3．脊髓损伤功能恢复的评价： 移植术后1天、1周、2周、3周、5周、7周、l0周分别进行肢体运动 功能评分(改良CBS评分)观察动物模型运动功能情况；术后5周、10周 取材脊髓标本，先行大体形态学观察，再行HE染色和嗜银染色，观察脊髓 损伤部位神经轴突的再生情况，免疫组化染色及荧光显微镜观察标记细胞在 脊髓损伤部位的存活、分布情况。 结果 应用差速贴壁和Ara．C抑制相结合的纯化培养方法培养出纯度较高的 l 嗅鞘细胞，胞体为梭形、扁圆形和多突起形三种形态，呈NGFRP75和GFAP 染色阳性反应。 移植术后1．10周各时段，大鼠后肢运动功能均有不同程度的恢复，10 差别均有显著意义(P0．0 1)，B组与A组疗效相似，C组与D组间无显著 差异(P0．05)。 HE染色和嗜银染色见B组和A组均有较多的再生轴突，并有神经纤维 通过损伤区，A组再生的轴突多于B组，C组与D组仅有极少散在的再生轴 突，无连续性神经纤维通过损伤区。免疫组化染色在损伤区可观察到存活的 嗅鞘细胞，分布于整个损伤区，而在存活的数量上A组比B组多。 结论 1．差速贴壁和Ara—c抑制相结合的培养方法兼收了两者的优点，能获到 较高纯度的嗅鞘细胞，满足细胞移植所用，实际应用效果好； 2．嗅鞘细胞静脉移植治疗急性脊髓损伤，其疗效与髓内局部移植相似， 受损神经功能有一定程度的恢复，且移植的嗅鞘细胞可在脊髓损伤区存活并 迁移； 3．嗅鞘细胞静脉移植操作简单易行，可多次重复治疗，并能避免再次手 术造成的脊髓