玻璃酸钠对角膜上皮细胞生长的影响.docVIP

精品论文 参考文献 玻璃酸钠对角膜上皮细胞生长的影响 袁振丽1　郝冬海1 　汪卓2　李博2(通讯作者) （1沈阳绿谷生物技术产业有限公司 110163；2辽宁何氏医学院　辽宁沈阳　110163） 【摘要】目的　比较含玻璃酸钠的盐酸左氧氟沙星滴眼剂与市售盐酸左氧氟沙星滴眼剂对角膜上皮细胞活力的影响。方法　体外培养家兔角膜上皮细胞，采用MTT法进行角膜上皮细胞活力的检测，同时进行一般形态学观察。结果　与空白对照组及市售盐酸左氧氟沙星滴眼剂组比较，含玻璃酸钠的盐酸左氧氟沙星滴眼剂组角膜上皮细胞连接紧密，生长状态良好。MTT结果显示，与市售盐酸左氧氟沙星滴眼剂组比较，含玻璃酸钠的盐酸左氧氟沙星滴眼剂组可显著提高细胞存活率。结论　含玻璃酸钠的盐酸左氧氟沙星滴眼剂组与市售盐酸左氧氟沙星滴眼剂组比较，可显著促进角膜上皮细胞的生长。 【关键词】玻璃酸钠　角膜上皮细胞　MTT 【中图分类号】R969.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2011）24-0087-02 玻璃酸钠(sodium hyaluronate，SH)为体内重要的生理活性物质，在眼科领域已得到了广泛的应用。目前研究表明SH作为滴眼剂的媒介不但起到保湿、润滑、提高生物利用度等作用，而且还具有抗氧化、促修复、降低滴眼剂中防腐剂不良反应等方面药理作用[1,2]。本研究应用MTT法观察含SH的盐酸左氧氟沙星滴眼剂与市售不含SH盐酸左氧氟沙星滴眼剂对角膜上皮细胞活力的影响。 1　材料与方法 1.1 实验动物 健康新西兰大耳白兔（京华阜康生物科技股份有限公司，生产许可证号：SCXK（京）2009-0004），体重2.0～2.5 kg，雌雄兼用。 1.2 主要试剂及仪器 含玻璃酸钠的盐酸左氧氟沙星滴眼剂（沈阳何氏药业有限公司提供），盐酸左氧氟沙星滴眼剂（沈阳利祥制药有限公司），DMEM/F12、PBS、胰酶、胎牛血清（Hyclone），MTT（Gibco），DMSO（天津市博迪化工有限公司），洁净工作台（苏净安泰），CO2培养箱（Thermo），倒置相差荧光显微镜（OLYMPUS），培养皿、96孔培养板（Gibco）。 1.3 角膜上皮细胞培养[3] 健康新西兰大耳白兔空气栓塞处死，无菌摘取眼球，生理盐水冲洗3次后用PBS缓冲溶液（含青霉素）浸泡30 min。解剖显微镜下用刀片刮取角膜上皮层，置于塑料培养皿中，加入含10％胎牛血清的DMEM/F12培养液，置37℃，5％CO2培养箱中培养。7d后，细胞长成单层，用胰酶消化后加入新鲜培养液制成细胞悬液，计数，以1.0times;105cells/mL接种于96孔板，培养细胞达80％融合度时进行实验。 1.4 细胞活力检测及一般形态学观察[4] 实验分为对照组、样品组、市售标准品处理组，样品组加入100mu;L终浓度含100%，75%，50%，25%，5%的样品，市售标准品处理组加入100mu;L同样浓度的市售标准品，对照组加入等体积的DMEM/F12培养液，于37℃，5%CO2条件下孵育24h后，在倒置光学显微镜下进行一般形态学观察，采用MTT法在492nm处读取酶标仪OD值，计算细胞存活率。每组设6个复孔，实验重复三次。 1.5 统计分析 实验数据以 表示，应用SPSS16.0统计学软件One-Way ANOVA检验，进行统计学分析，Plt;0.05代表有统计学意义。 2　结果 2.1 一般形态学观察 由图1可见，空白对照组长成连续单层，细胞呈不规则型、大小不均匀、排列比较稀疏。样品组长成连续单层，细胞呈六边形或不规则型、大小均匀、排列紧密。市售标准品组细胞近似六边形或不规则型，排列稀疏。与空白对照组及市售标准品组比较，样品组细胞紧密连接，生长状态良好。 图1 角膜上皮细胞各处理组一般形态学观察。A：空白对照组，B：市售标准品组，C：样品组。 2.2 样品与市售标准品对角膜上皮细胞活力的作用 由图2可见，当样品组与市售标准品组终浓度为25～100%时，与空白对照组比较，可见细胞有明显的损伤，这可能是由于左氧氟沙星与滴眼剂辅料在高浓度时的细胞毒性作用。当药物浓度降至5～10%时，与空白对照组比较，样品组与市售标准品组均可显著提高细胞存活率，且药物浓度在5%时，样品组与市售标准品组比较，样品组可显著提高细胞存活率。 图2 样品与市售标准品对