用低能氩离子束介导将水稻几丁质酶基因导入小麦.PDFVIP

第45 卷 第2 1 期 2000 年 11 月 简 报 用低能氩离子束介导将水稻几丁质酶基因导入小麦 吴丽芳 李 红 冯慧云 吴李君 余增亮 ( 中国科学院等离子体物理研究所, 合肥 230031; 丰乐种业离子束生物工程研究中心, 合肥 230031; 合肥高新技术产业开发区, 合肥 230031. Email: cdhu@mail.ipp.ac.cn) 摘要 用低能氩离子束介导将构建的 pCAMBIA1308 质粒载体上携带的几丁质酶基因(RCH8)导 入3 个小麦栽培品种扬麦158, 皖9210, 皖麦32 号的成熟胚细胞. 来自成熟胚的初生愈伤组织首 先经过含有20~30 mg/L 潮霉素(hygromycin, Hm) 的培养基的筛选培养, 获得的抗性愈伤组织转入 Hm 浓度为10~20 mg/L 的培养基上进行分化培养, 3 个小麦品种都获得了再生植株. 再生苗PCR 和PCR-Southern 检测结果显示, 绝大部分再生植株为阳性的转化植株. Southern 杂交检测表明外 源 RCH8 基因已整合到小麦基因组中. 植株转化率在不同品种间有所不同, 同一品种经不同剂量 的氩离子束注入后, 转化效果也存在较大差异: 皖麦 32 号最高转化率可达 3.8%; 扬麦 158 在 5 种离子注入剂量下的转化率为0.5%~2.5%; 皖9210 的转化率为0.5%~1.4%. 对转化二代植株中几 丁质酶基因的表达情况的检测结果显示, 有两个转化株系的幼苗叶片细胞粗提液对两种小麦赤霉 病菌毒菌株表现出抗性. 关键词 低能氩离子束 几丁质酶基因 小麦成熟胚 转基因植株 赤霉病抗性 植物病害是造成作物减产和粮食品质降低的重要原因. 小麦的绝大多数病害是由真菌引 起的, 因此, 选育具有耐抗真菌病害能力的优良小麦品种是非常有意义的. 在过去近 10 年的 时间里, 植物抗病基因工程研究取得了很大进展, 通过各种转化方法获得了不少转基因植 [1~3] [4] 株 , 特别是有关利用导入几丁质酶基因增加植物抗病能力的研究尤为引人注目 . 自 1991 [5] 年 Broglie 等人 首次报道转几丁质酶基因植物可以抗真菌病害以后, 围绕几丁质酶基因进行 的在不同植物上的转化工作进展很快, 到目前为止, 水稻 大麦 烟草等植物的几丁质酶基 因先后被导入水稻 烟草 番茄等植物中, 经检测, 一些转基因植物对真菌病害的抗病性有 [1~6] 不同程度的增强 . 低能离子束介导植物转基因是最近几年才发展起来的一种遗传转化技术, 在水稻和棉花 [7~9] 上得到成功应用 . 本研究用串联双 CaMV35S 启动子取代了水稻几丁质酶基因低表达活性 的天然启动子[10, 11], 构建成新的重组质粒, 作为小麦遗传转化的供体, 导入多个小麦品种, 获 得了一批转基因小麦植株. 1 材料与方法 ( ) 小麦品种和菌种. 小麦品种扬麦 158, 皖9210, 皖麦32 号由安徽省农业科学院甘斌 杰先生提供, 赤霉病菌种 F0 和F15 由南京农业大学细胞遗传研究所储诚垠先生提供. ( ) 质粒和菌株. RCH8