魏战勇王学斌黄克和金喜新董振杰郑兰兰.PDFVIP

22卷 3期 生 物 工 程 学 报 Vl01．22 No．3 2006年 5月 ChineseJournalofBiotechnology May 2006 IL．2与猪细小病毒 VPz基 因双表达载体 的构建及免疫原性的研究 ConstructionoftheEukaryoticExpressionVector thIL一 2 Gene and VP2 Gene of PPV and Research on Immunogenicity 崔保安 ，魏战勇 ，王学斌 ，黄克和 ，金喜新 ，董振杰 ，郑兰兰 CUIBao—An ，WEIZhan—Yong ，WANGXue—Bin ，HUANG Ke—He2，JINXi—Xin ，DONGZhen—Jie andZHENG Lan—Lan 1河南省动物性食 品安全重点实验室 ，郑州 450002 2南京农业大学动物 医学 院，南京 210095 1Henan研 ￡d60ra AnimalFoodSafety，Zhengzhou，tlenan450002，Ch／na 2CollegeofVeterinaryMedicine，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing，Jiangsu210095，China 摘 要 将 白细胞介素一2基 因和猪细小病毒 VP2基 因主要抗原区克隆至pCI—neo真核表达栽体 中，构建 了pCIneo-IL~一VP2重组 质粒 ，用脂质体将其转染到 PK-15细胞 中，利用免疫荧光方法检测在体外表达情况 。并 以小 鼠为动物模 型，将 pCIneo—Ik—v 重组质粒、对照组 pCI—neo和猪细小病毒活疫苗通过肌 肉注射进行免疫 ，检测免疫小鼠的淋 巴细胞转化功能，特异性 CTL杀伤 活性和血清抗体滴度。结果显示 ，pCIneo—Ik—VP2在体外能够诱导 PK一15细胞表达 VP2蛋 白，小鼠注射pCIneo-IL~一VP2质粒 1周 后能够诱导机体产生抗体 ，4周时达到峰值 ，与活疫苗对照组产生的抗体滴度 、诱导 T淋 巴细胞增殖和诱导强的细胞毒性基本 一 致。试验表 明，构建的pCIneo—I—VP2能够有效诱导机体产生体液免疫和细胞免疫 。 关键词 猪细小病毒 ，VP2基 因，IL-2，基因疫苗 中图分类号 Q78 文献标识码 A 文章编号 1000—3061(2006}03—0425—06 Abstract ToconstructgenevaccineofPPVandtoinvestigatetheeffectsofinterleukin2(IL-2)asanadjuvantonimmune responsesinmouse，therecombinantexpressionplasmidofpCIneo-I —VP2WritsconstructedandtransfectedintoPK-15cellsby lipo fectamine，theexpressedproductwasdetectedbyimmunofluoreassay．TostudytheimmuneeffectsofDNA vaccineinvitro andinvivo，micewereusedastheanimalmode1．Therecomb inantplasmidpCIneo-I -VP2，thecontrolplasmidpCI．neoand thePPVlivevaccinewere immunizedbyintramuscularinjection．Anti-PPVantibodieswere measuredbyELISA．1ymphocyte proliferationactivitywasdetectedusingMTFmethod，andthe specifickillingactivitiesofCTLwere assayedtoo．Th eresults show thattheimmunizedmi ceproducedPPV antibodyafteroneweek．an