盐酸精氨酸注射液的细菌内毒素检查方法验证及检查方法的建立.docVIP

精品论文 参考文献 盐酸精氨酸注射液的细菌内毒素检查方法验证及检查方法的建立 魏淑梅　王宝庆 （牡丹江市食品药品检验检测中心　黑龙江　牡丹江　1 5 7 0 1 1） 【摘要】目的:建立盐酸精氨酸注射液细菌内毒素检查方法。方法：按中国药典2010版二部附录收载的细菌内毒素检测方法及指导原则进行实验。结果：盐酸精氨酸注射液在至少10倍稀释后，不干扰鲎试剂与细菌内毒素的凝集反应。结论：三批盐酸精氨酸注射液用细菌内毒素检查法进行验证，可以用细菌内毒素检查法检查盐酸精氨酸注射液的热原。 【中图分类号】R 4 4 【文献标识码】B 【文章编号】1007-8231（2011）09-13 15-02 1　仪器与试药 微量取液器（50-250mu;l）,XW-80A型旋涡混合器,AL-40型试管恒温仪,细菌内毒素检查用水（BET）1001220,细菌内毒素工作标准品1 5 0 6 0 6 - 2 0 1 0 6 0 1 6 0 EU /m l , 鲎试剂（TAL）1005363 1008235 1016485盐酸精氨酸注射液,规格20ml:5g批号090705 090801 090906 用法：滴注：5～10g,一日：10～12g。 2　方法与结果 2.1　鲎试剂灵敏度复核　鲎试剂灵敏度复核试验按细菌内毒素检查法操作，结果灵敏度在0.5lambda;～2.0lambda;之间，表明鲎试剂灵敏度标示值符合规定。 2.2　内毒素限值的确定[1]L=K/M,其中K为按规定的给药途径，人每公斤体重每小时可接受的内毒素最大剂量，注射剂的K=5EU/（kgmiddot;h）M为人用每公斤体重每小时给的最大剂量M=6000mg/60kgmiddot;h,则L=K/M=5times;60/6000=0.05EU/mg，则本品的细菌内毒素理论限值,L为0.05 EU/mg。 2.3　供试品MVD的确定及稀释液的制备根据MVD=CL/lambda;=200times;0.05/0.25=40倍其中C=200mg/mllambda;=0.25EU/ml L=0.05EU/mg，当不同灵敏度的鲎试剂MVD则不同，本文采用lambda;=0.25EU/ml则MVD=40倍,我们选用几个稀释液进行试验，如1：5，1：10，1：15三个稀释级别进行干扰试验。 2.4　供试品干扰初筛试验[2] 用细菌内毒素检查用水将供试液批号（090705 090801090906）分别稀释成1：5，1：10，1：15系列浓度，以各稀释浓度样品将细菌内毒素工作标准品稀释成2lambda;，1lambda;，0.5lambda;，0.25lambda;系列浓度的内毒素溶液，将上述溶液与鲎试剂混合，进行抑制试验，结果见表1。 供试品在原液时以及1：5浓度时对细菌内毒素检查有抑制作用，供试品在10倍稀释后对鲎试剂无干扰作用，每一浓度重复做3次，结果均相同。 2.5　供试品干扰试验[2] 将样品10倍稀释后作为供试液，取供试液和细菌内毒素检查用水分别将内毒素稀释成0 . 5 E U /m l , 0 . 2 5 E U /m l , 0 .12 5EU/ml ,0. 06 25 EU/ml系列浓度，分别取0.1ml加入0.25EU/ml的鲎试剂0.1ml，每一浓度平行做4支管，另取供试液和细菌内毒素检查用水各做2支阴性对照管，结果见表3。表2表明，供试液经30倍稀释后，对鲎试剂无干扰。 2.6　样品细菌内毒素检查 取3批盐酸精氨酸注射液（090705 090801 090906）每批5支，采用灵敏度0.25EU/ml的鲎试剂，将样品稀释10倍，分别按中国药典2010年二部细菌内毒素法检查[2]，结果符合规定。 3　讨论 从上述实验可知,盐酸精氨酸注射液的10倍稀释液对细菌内毒素检查法无干扰作用,该方法与家兔法相比,具有简便、迅速、重现性好、灵敏度高等优点,可以作为检测盐酸精氨酸注射液细菌内毒素的方法。 参考文献 [1] 宫爱武,任仙梅,刘玉华;浅谈细菌内毒素检查法的使用[J];包头医学;2001年02期;46. [2] 中华人民共和国药典2010年版二部附录XIE.