同源四倍体水稻与狼尾草杂交的细胞学观察研究.pdfVIP

———— 奎整曼亟叠蕉壁坌煎 盟 同源四倍体水稻与狼尾草杂交的细胞学观察+ 黄群策”邓启云。刘文海。 (①湘潭师范学院生物系．湘潭411201：@国家杂交水稻工程技术研究中心 摘要 f以同源四倍体水稻脱8(4)和二倍体水稻IR28(2】为杂交母本，以狼尾草 为花粉供体进行杂交配组，利用激光扫描共聚焦显微技术对其细胞 学特点和可交配性进行了观察鉴定。观察结果表明，二倍体水稻与 狼尾草很难杂交，而同源四倍体水稻与狼尾草进行杂交时表现出一 定的可交配性。、狼尾草的花粉粒能在同源四倍体水稻的柱头上萌 发，花粉管能在花柱内伸长，直至通过胚囊的珠孔端进入胚囊内。 在同源四倍体水稻与狼尾草的杂交中存在着双受精现象，此外，还 存在着精核与极核以及精核与卵核的单受精现象。由此认为，同源 四倍体水稻与狼尾草杂交可以获得实粒种子，本试验的研究结果为 解释这种奇特的生殖现象提供了胚胎学证据。 关键词 同源四倍体水稻 狼尾草 激光扫描共聚焦显微技术 胚胎学 自20世纪50年代以来，水稻育种家们一直期望着通过远缘杂交方式将异源物种中的 优良基因导入到水稻中，创造出水稻新种质，进而在更高的水平上挖掘水稻的增产潜力。 狼尾草(Permisetum 多种病虫害等优起性状，前人曾试图通过二倍体水稻(Oryms耐眠2n=x=24)与狼尾草杂交 后创造出水稻新种质。然而，由于两者的生殖隔离很严格，有性杂交很难成功，试图通过 远缘杂交获得充实度达到正常水平的杂种F0种子是不可能的【112l。根据同源四倍体水稻 sat／va,2n=4x=48)的生殖特性，即有性生殖能力比较弱，遗传可塑性比较大而遗传保 (Orym 守性比较小”“1，我们以同源四倍体水稻为杂交母本与狼尾草进行了远缘杂交，由此获得 了饱满的F。实粒种子，杂交结实率的变幅高达0．45％～8．54％，杂种F．种子具有一定的 发芽率和成苗率“。对于同源四倍体水稻与狼尾草杂交后比较容易获得实粒种子这种奇特 的远缘杂交现象，很有必要从细胞学水平阐明其胚胎学机理，以便为水稻远缘杂交寻找到 新的突破口。我们利用激光扫描共聚焦显微技术对同源四倍体水稻与狼尾草杂交的受精过 程进行了细胞学观察研究，旨在阐明其杂交结实的胚胎学基础。 ‘湖南省自然科学基金资助项目(批准号为99JJY2072) 塑 !塑!±主旦盗主壁重查苤金鱼墨叁 1材料和方法 11杂交配组 以同源四倍体水稻IR2814^试验材料的下标(41和f21分别代表同源四倍体和二倍体)和：倍 体水稻IR282)为杂交母本，以狼尾草为花粉供体。在授粉前ld对杂交母本的稻穗进行修 整，保留第2天将开花的颖花并对其进行人工剪颖去雄。每份材料去雄62个稻穗，每个 稻穗上保留20～30个去雄颖花，去雄后套袋隔离以防串粉。去雄后的第2天r午向每份 母本材料的60个去雄穗稻的颖花内投入新鲜的狼尾草花粉粒。另外，每份材料保留2个 去雄稻穗不予授粉以作为对照。 (1)材料固定：利用新鲜的狼尾草花粉粒给去雄颖花授粉后进行材料固定。在授粉后 料共计60个授粉稻穗)，将其标记后固定在FAA溶液中，在4C条件下保存备用。此外． 将每份材料中保留的2个去雄而未授粉的稻穗，在去雄后48h也固定在FAA溶液中保存 备用。 (2)细胞学观察鉴定：在试验中首先将每份固定颖花内的子房剥出，在室温下利用 70％、85％和95％的乙醇进行梯度脱水，每梯度浸泡时间为20min。随后，将子房放入无 水乙醇中浸泡2次，每次2ll，再转入无水乙醇中过夜。第2天将已脱水的子房放入无水 乙醇：冬青油(1：I)的混合溶液中过渡1h，再用冬青油清洗3次，前2次清洗时每次浸泡 2h，最后1次浸泡15h。材料经过透明处理后可以在冬青油中保存备用。 利用激光扫描共聚焦显微技术对试验材料进行细胞学观察鉴定。首先将保存在冬青 油中的子房放置在凹玻片的中央，00000加l滴冬青油，盖上盖玻片，用指甲油封片。随 MRC600 后，在激光扫描共聚焦显