小鼠巨噬细胞吞噬凋亡细胞的炎症调节及性别差异研究.pdfVIP

所 院 ： 北京协和医学院基础学院 姓 名 ： 冯雪莹 指导教师： 韩代书教授 学科专业： 细胞生物学 研究方向： 细胞吞噬 201 完成日期： 1年5月 目 录 中文摘要……………………………………………………………………………．．2 Absl}l?act…………………………………………………………………………………………………………．3 缩略语表……………………………………………………………………………5 前日Ⅱ 言…………………………………………………………………………………………………………7寄…………………………………………………………………………………………………………7 实验材料……………………………………………………………………………9 实验方法…………………………………………………………………………．16 结 果………………………………………………………………………………………………………．27 第一部分炎症微反应对巨噬细胞吞噬能力的影响…………………………27 第二部分评价体内巨噬细胞吞噬凋亡细胞的新方法………………………39 第三部分巨噬细胞吞噬能力的性别差异……………………………………．45 i．寸 论………………………………………………………………………………………………………．58 参考文献…………………………………………………………………………61 全文小结…………………………………………………………………………。66 文献综述…………………………………………………………………………．67 发表文章…………………………………………………………………………．97 致 谢………………………………………………………………………………………………………．98 ’ 中文摘要 背景与目的：炎症恢复涉及浸润免疫细胞的凋亡和消除，炎症介质对其具有调节作 用，其机理有待深入研究；目前对吞噬机理的认识主要基于体外研究，建立一种方 便、准确评价体内巨噬细胞吞噬能力的新方法有助于研究生理状态下细胞的吞噬； 有证据表明凋亡细胞清除缺陷与多种自身免疫性疾病相关，而与吞噬缺陷相关的自 身免疫性疾病在女性中的发病率远高于男性，不同性别中巨噬细胞吞噬凋亡细胞的 能力尚无研究。 材料与方法：小鼠中性粒细胞37℃培养24h使其自然凋亡，小鼠胸腺细胞用地塞米 松(DEX)诱导凋亡，凋亡细胞用Anx-V标记鉴定；分离小鼠腹腔巨噬细胞，用其标 志物(F4／80)的抗体鉴定。体外巨噬细胞与凋亡细胞共培养评价吞噬能力；体内实 验，将凋亡细胞注射入小鼠腹腔，显微镜下观察或流式细胞仪分析巨噬细胞对凋亡 的水平。 ． 结果：发现炎症诱导剂细菌脂多糖(LPS)特异性抑制巨噬细胞吞噬凋亡细胞，LPS可 ’ 噬能力。而且发现LPS抑制Gas6的表达不依赖于TLR4受体。 建立了体内评价吞噬能力的新方法：凋亡细胞用FITC标记，注射入小鼠腹腔， 1h后用PE标记的F4／80抗体鉴定巨噬细胞，台盼蓝淬灭粘附凋亡细胞的荧光。 F4／80+／FITC+双阳性细胞为吞噬了凋亡细胞的巨噬细胞。利用这一方法证实在体内 LPS可以抑制巨噬细胞吞噬凋亡细胞的能力。 不同性别小鼠巨噬细胞吞噬凋亡细胞的能力存在差异，与鼠龄相关。在青春期 (2—6月龄)和中年(12—18月龄)鼠中，雄性鼠巨噬细胞吞噬凋亡细胞的能力高 于雌鼠；而未成年组(小于1月龄)和老年组(大于24月龄)则相反。相同性别中 成年及中年小鼠巨噬细胞吞噬能力高于未成年组和老年组。而且激素水平不能显著 影响巨噬细胞的吞噬能力。 结论：LPS通过诱导TNF．-0t和抑制巨噬细胞Gas6的表达干扰巨噬细胞吞噬能力， 为认识炎症因子调节吞噬凋亡细胞的机理提供了新的线索。建立了评价体内吞噬能 力的新方