生化试验（吉林大学）Day4~2米氏常数.pptVIP

下载本文档

7
0
约小于1千字
约 3页
2018-01-31 发布于浙江
举报
版权申诉

生化试验（吉林大学）Day4~2米氏常数.ppt

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

蔗糖酶米氏常数的测定操作方法 1）将离子交换柱层析得的E3稀释(pH4.6 HAC缓冲液)至20U/mL，共16ml。 2）取试管8支，按0--7编号，0为对照管。 3）按表1将蔗糖液、醋酸缓冲液分别加入试管中，于35℃水浴中保温（使温度平衡，以下同）10min。 4）取约16ml酶液，放入同一水浴中保温约10min。 5）于各管中依次按同样时间间隔加入已保温过的酶液2ml，记时，立即摇匀。在35℃水浴中准确反应3min。 6）按同样次序和时间间隔，加入0.5ml的1mol/L NaOH，摇匀，终止反应。 7）吸取反应混合物0.5ml，加入盛有3ml DNS试剂和1.5ml去离子水的血糖管中，放入沸水中加热5min，冷却后稀释定容至25ml，摇匀后，测定A540值。反应物活力测定数据处理管号 0.1mol/L 蔗糖液 pH4.6 buffer 酶液（ml） 1mol/L NaOH (ml) 吸取反应物 (ml) DNS 试剂 (ml) 水 (ml) A 540 底物浓度 (S) 1/S 1/A 0 0 2.00 2.00 0.5 0.5 3 1.5 0 1 0.4 1.60 2.00 0.5 0.5 3 1.5 0.010 100 2 0.5 1.50 2.00 0.5 0.5 3 1.5 0.0125 80 3 0.6 1.40 2.00 0.5 0.5 3 1.5 0.015 66.7 4 0.8 1.20 2.00 0.5 0.5 3 1.5 0.02 50 5 1.0 1.00 2.00 0.5 0.5 3 1.5 0.025 40 6 1.5 0.50 2.00 0.5 0.5 3 1.5 0.0375 26.7 7 2.0 0.00 2.00 0.5 0.5 3 1.5 0.050 20 数据处理：以A值作为相对反应速度，以1/S为横坐标，1/A为纵坐标作图，由图求出Km和Vmax值。 * * * * * *