生物制药工艺学教学（吉林大学）2016第二章细胞工程（3）.pptVIP

主要合成途径 即利用糖和氨基酸这些可从培养液中摄取的简单的含碳、含氮复合物来合成核苷酸，进而合成DNA。 这一过程需四氢叶酸参与供甲基及甲酰基，因此该途径可被叶酸拮抗物氨基喋呤阻断。 * 细胞可通过次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 （HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK），将核苷酸前体合成核苷酸以供DNA合成的原料。 补救合成途径 * DNA的生物合成途径与HAT选择培养基 H—hypoxanthine （次黄嘌呤）A—aminopterin （氨基喋呤）T—thymidine （胸腺嘧啶核苷） A T H IMP DNA 核苷酸 糖和 氨基酸 TMP HGPRT TK 核苷酸 前体 * 杂交瘤细胞的筛选 杂交瘤细胞继承了B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞的双重特性。 HAT(H-Hypoxanthine次黄嘌呤，A-Aminopterin甲氨喋呤，T--Thymidine 胸腺嘧啶核苷)培养基的选择培养。 HAT选择性培养基是根据次黄嘌呤核苷酸和胸腺嘧啶核苷酸生物合成途径设计的。 在历经2 周左右的时间后即可得到该杂交瘤细胞, 成为制造单克隆抗体的细胞源。 * 杂交瘤细胞的筛选 脾细胞 (B淋巴细胞) 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 脾细胞/脾细胞 骨髓瘤细胞/ 骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 脾细胞 筛选出 不能长期存活 不能长期存活 不能在HAT培养基 中生长 * 抗体（antibody）： 由B细胞产生的免疫蛋白，它能识别抗原的某一特定位点。抗体分子由两个完全相同的重链分子以及两个完全相同的轻链组成。 B细胞（B cell）： 由骨髓细胞分化而来的能产生抗体的淋巴细胞。 单克隆抗体: 是将抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而生产的。 单克隆抗体及其制备 将抗原物质经不同途径注入动物体内，经数次免疫后采取动物血液，分离出血清，由此获得的抗血清即为多克隆抗体 * 单克隆抗体制备 选择培养基 杂种细胞 免疫处理 * 单克隆抗体的应用 用于疾病的诊断和治疗： 利用单克隆抗体检测与某些疾病相关的抗原，辅助临床诊断， 用放射性核素标记单克隆抗体进行肿瘤显像，进行免疫鉴定。 用于临床治疗--如针对T淋巴细胞共有的分化抗原CD3的单克隆抗体，用作免疫抑制剂。 单克隆抗体还可作为载体药物可对肿瘤进行定向治疗。 * 早孕检测试纸条 女性在怀孕以后体内会分泌绒毛膜促性腺激素。早期检测该激素, 对女性具有非常重要的指导意义。 女性排卵检测试纸条 准确检测出尿液中促黄体生成激素的峰值水平, 使女性能预知最佳的受孕或避孕时间。 * 乙肝表面抗原检测试纸条 特异性地检测标本中的乙肝表面抗原, 重复性好, 质量稳定。 吗啡类毒品检测试纸条 样品中的吗啡含量大于300ng／mg，即可被检出。 * * 第四节 染色体工程 * 真核细胞染色体的组成 组蛋白：H1、H2A、H2B、H3、H4； 非组蛋白：HMG、DNA结合蛋白； DNA：不重复序列；中度重复序列；高度重复序列 少量的RNA； * 什么是染色体工程？ 染色体工程（chromosome engineering）： 　　是人们按照一定的设计，有计划地消减、添加或代换同种或异种染色体，从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。 广义上讲它还应包括染色体内部的部分遗传操作技术，因此也称为染色体操作。 * 染色体数目变异 整倍变化： 多倍体：细胞中含有三个或更多染色体组的个体 单倍体：细胞中含有正常体细胞的一半染色体数 非整倍体变化： 染色体减少：单体（减1条）、缺体（减1对） 染色体增加：三体（加1条）、四体（加1对） 染色体代换：同种代换、异种代换 * 动物染色体倍性改造 优点： 多倍体与二倍体相比，最显著的特点是形态上的巨大性。 糖类、蛋白质及其它产物的含量也有所提高。 由于多倍体动物具有生长速度快、成活率高及抗病能力强等特点，所以可通过人工诱导多倍体来改善生物的经济性状。 * * 动物雌雄核发育 ——单倍体育种 雌核发育：精子虽然正常地钻入和激活卵子，但精子的细胞核并未参与卵球的发育，精子的染色体很快消失，胚胎的发育仅在母体遗传控制下进行 雄核发育：因经过紫外线、X射线和γ射线处理的卵子与正常的精子受精，再在适当时间施以冷、热或高压等物理处理，使进入卵子内的精精子染色体加倍，而发育为完全为父本性状的二倍体 * “无父之鼠” * 植物细胞工程的应用： * 诱导植物愈伤组织 体细胞胚状体的诱导 体细胞胚状体的成熟 体细胞胚状体+人工胚乳,外面包裹人工种皮 人工种子 人工种