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3.由于其主要以散发的形式在群体中流行，并且本质的病因学起源各异，因此，基于经典家系资料样本利用分子标记进行连锁分析定位克隆的策略是不够妥当的。另外，由于大多数T2DM的发病年龄集中在中青年以后，并且有增龄性的发生趋势，由于人类的整体寿命的上限限制，多代患者间同时存在T2DM发生的几率很低。因此，从风险等位基因在多代间的传递规律上分析基因的T2DM易感性，也是受到限制的，一般情况不只能进行到2代间分子标记的传递研究。 4.“病例—对照”研究是预防医学领域中流行病学的经典研究策略，不同于经典遗传学的理论，它研究的是在现实群体中，某种疾病相关的环境因素或遗传性内因的暴露和该疾病的人群分布状态，通过该策略，最终拟解决的问题，是该人群不同程度下暴露的环境因素或遗传性内因与疾病的关系，并且希望得到的是适合于指导本人群中绝大多数人进行疾病预防和早期干预的信息。 5.对于人群中现实存在的复杂多基因疾病的易感基因筛查，由于该疾病的特点，决定了预防医学学科和生物学学科的相互渗透和结合。应运而生地，基于随机群体中收集的T2DM患者和正常NGT对照人群资料进行“病例—对照”研究，是现代国际上寻找人群中的T2DM分子病因学因素的主流策略。同时考虑遗传与环境交互作用的影响。 6.目前研究认为，除了T2DM中的主效基因模式类型外，研究其易感基因时采用相关分析比连锁分析更有效，但由于连锁不平衡仅存在于染色体上极窄的区域内（在混合人群中，连锁不平衡的范围仅为2.5-10kb），因此要想通过基于连锁不平衡的相关分析进行基因组扫描，遗传标志的密度需要在5-20kb才能保证所有的易感基因均被检测到，这要求分布于整个基因组的极高密度的遗传标志，目前所认识的遗传标志中，只有单核苷酸多态性（SNP）符合这一要求。 7.由于相关分析所需的样本量较大，因而整个扫描工作的工作量将会非常巨大，这就要求遗传标志的检测功能自动化进行，SNP的检测手段正是朝着这一方向发展，因而极有可能成为未来研究糖尿病等多基因疾病相关基因的重要工具。 8.SNP作为有效的研究工具，是指染色体基因组水平上单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性。在人群中的发生频率大于1%。SNPs包含了基因组已知多态性的80%-90%是最常见的遗传变异类型。遗传的选择压力导致SNP在单个基因及整个基因组中的分布是不均匀的，在基因编码区大约有200,000个SNPs，称cSNPs，与蛋白质功能有关，在非编码区的SNPs称ucSNPs。非编码区的SNP比编码区的SNP多。 拟采取的研究方案： 1、本研究考虑到T2DM属于多基因复杂性疾病，并且以散发为主的特征，以散发群体筛查为主导，小家系进行垂直验证为辅助参考，进行T2DM易感基因的关联筛查和验证工作。T2DM以候选基因为标记，采用基因组改良扫描方法进行实验室分型。 2、拟对有关联编码基因标记按染色体分型，可通过PCR-RFLP方法电泳定型在8%聚丙烯酰胺凝胶上电泳定型、银染、酶切，确定基因型。对无关联编码基因标记，选用相应数量的微卫星进行特定染色体的扫描，来寻找疾病候选位点。基因分型结果通过遗传学统计软件SAGE3.0、Genehunter2.0、Allegro等软件作两点或多点的连锁和连锁不平衡分析和家系内基因传递和分离的TDT分析，以便确定染色体不同位点与疾病的相关性，并通过LOD分数高低定位某些排序有高概率的位点基因 3、按DM的病因学，除需要精细定位，还需要有可靠的 群体case-control验证。所有拟定的候选易感基因，需要进行良好匹配，有足够数量的case-control验证和比较，进行Hardy-Weinberg平衡检测检查有否人群代表性。有良好的实验室质控，以保证实验稳定，数据可靠。采用传统的连锁和连锁不平衡分析方法进行遗传学统计分析。有完整父母信息的可用TDT方法进行分离分析传递不平衡检测。 4、采用Logist回归及神经网络模型及叉生分析进行危险因素 的遗传与环境的交互作用分析。根据数据具体情况采用相对应的分析方法。 研究方法 1、本研究中涉及的寻找疾病易感基因的策略人类基因组 计划完成后，基因组DNA序列明确将简化识别疾病易感 基因的步骤。候选克隆技术正成为复杂形状基因克隆的 一种快捷高效的策略。目前研究糖尿病相关基因常用的 技术是基因组扫描和连锁分析，连锁分析适用于分析基 因型与表型有较密切关系，且疾病表型较单一的致病基 因，而对于以多个微效基因为特征的T2DM易感基因的 定位克隆不太适用。一般认为：研究T2DM等多遗传因素 及环境因素参与的复杂性疾病时，采用基因群体的基因 组SNP“case-control”关联分析，特别是基于连锁不平衡 （linkage disequilibrium,LD）的关联分