神经干细胞移植对缺血缺氧性脑损伤大鼠的行为学影响.docVIP

精品论文 参考文献 神经干细胞移植对缺血缺氧性脑损伤大鼠的行为学影响 徐奕鹏 谢荣（新疆维吾尔自治区人民医院康复科 新疆乌鲁木齐 830001） 【摘要】目的 探讨NSCs移植恢复缺血缺氧性脑损伤大鼠行为功能的可行性。方法 建立缺血缺氧性脑损伤模型，在建模后72 h进行经脑室NSCs移植,不同时间点对实验动物进行足印分析试验评估。结果 足印重复间距试验结果显示NSCs组术后3周、7周时实验鼠左侧前后肢足印重复性较好。表现为间距较小，且间距稳定，明显小于HIE（Plt;0.01））。结论 NSCs移植可恢复缺血缺氧性损伤大鼠的行为学功能。 【关键词】神经干细胞移植 行为学 缺血缺氧性脑损伤 【中图分类号】R49 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）24-0158-02 1 材料 1.1实验动物 健康7日龄Wistar大鼠40只，清洁级，雌雄不限，体重13.75plusmn;0.35g。 1.2实验药品 异氟醚吸入麻醉剂DMEM /F12无血清专用培养基、小牛血清1.2.4碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子EGF、青霉素/链霉素、B27无血清添加物、L2谷胺酰胺。 1.3实验器材 国产手术显微镜、显微手术器械、动物缺氧箱、智能氧量分析仪、小鼠立体定位仪、微型磨钻、微量注射泵、微量进样器（10UL）、足印分析装置 2 方法 2.1实验分组 随机分为两组：NSCs组（n＝20），HIE组（n＝20）。 NSCs组：生后7天Wistar大鼠麻醉条件下行左侧颈总动脉双重结扎并离断，置于缺氧环境中缺氧3小时；3天后进行神经干细胞移植。 HIE组：生后7天Wistar大鼠麻醉条件下行左侧颈总动脉双重结扎并离断，置于缺氧环境中缺氧3小时；中途脱落12只，最终移植组11只，对照组17只进入评估。 2.2模型的制作 2.2.1神经干细胞的制备 将E14孕鼠夹取胎鼠大脑皮层组织，用D-Hanks液冲洗。将脑组织剪成1.0mm3小块，吸管吹打成单细胞悬液离心5min，弃上清，1times;106/4mL密度置条件培养基中培养。 2.2.2 HIE大鼠模型的制作 HIE组：选用出生后第7天Wistar大鼠，异氟醚吸入麻醉，显微镜下分离颈总动脉后双重结扎并离断。术后麻醉恢复2小时后放置于混合8%氧＋92％氮气缺氧箱中2小时。 2.2.3 HIE大鼠神经干细胞移植模型的制作 NSCs组：选用出生后第7天Wistar大鼠，麻醉后双重结扎颈总动脉并离断。麻醉恢复2小时后放置于混合8％氧＋92％氮气缺氧箱中2小时。术后3天进行神经干细胞移植。将2mu;L移植液注入新生大鼠的左侧脑室内。 2.3评价方法 足印分析实验：对术后3周大鼠进行足印分析实验。 具体方法如下：训练阶段，将28times;42cm白纸铺在实验台上，一端与目标盒相连。将动物前后足底刷不同颜色油漆。将动物放置于白纸一端，使其朝着目标盒方向走，计算动物穿过白纸进入目标盒的时间，即为潜伏期。每天每只动物训练3次，连续3天后可进行正式测试。主要观察指标为潜伏期及前后爪的重复步态间距。 3 结果 统计数据显示：术后3周NSCs组左侧重复步态间距0.652plusmn;0.1 18191cm，小于对照组1.427plusmn;0.210cm，经统计学处理后认为差别有统计学意义（P＜0.01）；右侧移植0.500plusmn;0.071cm，小于对照组1.392plusmn;0.226cm，经统计学处理后认为差别有统计学意义（Plt;0.01）。术后7周时移植组左侧重复步态间距1.201plusmn;0.204cm，明显小于对照组HIE2.532plusmn;0.191cm，两组比较差别有统计学意义（P＜0.01）；移植组右侧重复步态间距0.959plusmn;0.234cm，小于对照组HIE2.114plusmn;0.199cm，两组比较差别有统计学意义（P＜0.01），如表1、2所示。 表1 两组实验鼠术后3周步态重复间距比较（x-plusmn;S） 分组 左侧(cm) 右侧(cm) 移植组NSCs 0.652plusmn;0.118 0.500plusmn;0.071 缺血缺氧组HIE 1.427plusmn;0.210 1.392plusmn;0.226