DNA内切酶专一性和非专一性相互作用的动力学和热力学研讨.pdf

研究论文与综迷 全国第六届工业生化学术会议 (1999,福建)论文集 DNA一内切酶专一性和非专一性相互作用的动力学和热力学研究 孙连魁 西北大学生物系，西=si-市710069) 协 1 前n 蛋白质和核酸是生物体内极为k:要的两类戈分f物ur_ 不仪它们的结钩和功能与生命现象密 切相关，而且它们之间如何相互作用对1生命现象史是至义}T要 厂解 些草因调控蛋日与核酸 的相’]_作用对解释和揭小 一些重要的生命现象nnk_很有价伯的 内切酶不仅是 一种1C.因调柞蛋自、而tL也是遗传 1程的开术刀 自1968年P11970年Arber和 Smith先后肖先发现I型和II型内切酶以来，科学家对内切酗的研究多注币十 r1)内切酶的分离纯化力法及1T化性质的研究 2‘1-找和rc选新的内切}0; (3少内切 酶在核酸分析，基因图谱和DNA}-组中的应川研究.fl.;ai内切酶的作用机制和理论研究很少丫86 年我们获国家自然科学ti-金的资助，对内切M动力学和热力学进行J研究 这一研究不仪有助f」 解DNA与基因调控蛋自相r3.作用的一沙机理.而日利内明所在遗传L程中的应用也有 定的指导 意义 ‘ 乡 2 实验材料和方法 我们用酶动力学和热力学k法，以EcoRl,BgIll,Prul,Smal,BamHl,Xhol;}种内切酶 和人一DNA,Adv;一DNA,P一DNA,pBR322 DNADR种底物交4zlr401A,Ii.V!L研制内)1 脑对DNA的切W9U6理,%DNA构象 t线状和1111.1、tI内l;1fl的1zfl;1i; 2.1酶活的测定 酶活的测定方法采用部分酶OIDNAtW;c全消化， 然几尹杠泳、1-1描电沐凝胶 (M1) R 据各DNA片段浓度对时间}(I依摘性 以EcoRI切~9p一DNA为例 ‘叭图1} 可按下列公式计f;DNAt.各内切酶rJl}:,的切刽迪r{ 凡 1一expItip, 氏 {I一exp--1[I一exp‘，1 凡 〔I一exp- 〕 【1一exp} 凡 1一exp.x, 这T凡 毛‘，代表切割时间为t时，某DNA片段的切割比率，如 片段A的荧光强度 HA(c) 所有片段的荧光强度x片段A,,DNA总氏的0分数 KIK，，K。分别是三个限制位点的切割速度 上述方程是1976年Forsblom,S.等人根据DIVA的片段浓度对时}，]的依赖性推导出的，但只适 用I-线状DNA 由fS.作的需要t我们根据同 原理 又摊呀出了内切酶切割环状DNA时切割 125 研究i4文与综述 全国第六届工业生化学术会议 !1999,福建)论文集 ，笋 二久久一一D 硬 探 :队娇 时 竺七L-A认/ ...il}.I}} 洲丫4iVL. e ‘ ， ;，，}n!5.7乞兔‘ut;一一之U__沪2