大米草内生细菌的分离和鉴定研究.pdfVIP

·3272· 中国环境科学学会学术年会优秀论文案(2006) 大米草内生细菌的分离和鉴定 刘 建马丽娜杜文琴黄素芳刘 波 (福建省农科院生物技术研究所福州350003) 摘要本研究采用MIDI一气相色谱鉴定系统，将从大米草上分离到的内生细菌进行鉴定，共鉴定 出6株大米草内生菌。 关键词大米草 内生菌MIDI一气相色谱鉴定系统 大米草(SpartinaangliC．E．Habb)，原产于英国南安普顿港，禾本科格兰马草属，宿根性 强草本植物，具有非常发达的地下茎，依地下茎及种子繁殖。由于大米草具有抗逆性强、适应性 广、分蘖力和繁殖力强、种群密度高、群落生物量大等特点，它很快被宣传报道为保滩护岸，促 淤造陆的先锋植物、优良的牧草饲料。于是全球各地都开始大规模引进。我国1963引种成功， 1974起先后在全国沿海开始大面积推广，到1981年底我国南起广西合浦县北至辽宁锦西县共有 3．6万hm2。然而正是由于大米草极强的抗逆性，以及缺乏生态制约因素，而又没有行之有效的 防治措施，大米草在全球范围迅速蔓延，致使航道被淤；滩涂被占；原有滩涂生态遭到严重破 坏，严重影响了沿海航运、滩涂养殖、滩涂生态以及海滩旅游。大米草也由保滩固堤、促淤造陆 的先锋植物转变成为一种全球性草害。20年前福建省福安市白马湾有红树林约200hm2，现仅剩 百余株零星点缀在一望无垠的大米草丛中，岌岌可危。大米草的生物入侵仅仅对福建省宁德地区 滩涂养殖造成的直接经济损失每年就高达近十亿元，而对生态环境造成的损失更是无法估计。 本试验研究大米草内生细菌的特征，对研究大米草的生物入侵及防除提供一定的基础。 一、试验方法 1．仪器和材料 (1)气相色谱仪(Agilent6890) oC灭菌15min) (2)培养基：NA，TSB(TSB309，琼脂粉159，加水至1L，121 (3)脂肪酸提取前处理试剂： [试剂1]NaOH 45 g 甲醇(HPLCgrade) 150ml 150 去离子蒸馏水 ml 水和甲醇混合后加入NaOH中，同时搅拌至完全溶解 [试剂2]6．00N盐酸 25ml 甲醇(HPLC 275ml grade) 把盐酸加入到甲醇中，并不断搅拌 [试剂3]正己烷(HPLCgrade) 200ml MTBE(HPLC 200ral grade) 把MTBE加入到正己烷中，并搅拌均匀 [试剂4]NaOH 10．89 去离子蒸馏水 900ml (4)主要仪器：脂肪酸细菌鉴定仪 第七章其他相关领域研究进展 2．实验方法 (1)内生细菌的分离 取新鲜大米草茎叶，70％酒精消毒30s，升汞消毒3rain，再用无菌水清洗3遍，移入研钵， 研钵内加入lml无菌水，研碎，取20山清洗后的水，于肉汁冻培养基(A)。上涂布培养，共涂 布3板，30±1．5℃培养。 (2)细菌的纯化 培养24h后，分别将平板中不同的菌，挑入不同的 NA平板中进行划线培养。培养24h后，再纯化培养一 次。 (3)细菌的纯培养 分别将纯化后的每一株菌，采用右图所示的方法在 TSB平板上划线培养。培养皿的建议画线法：采用四区画 线法，如右图。在此模式中希望达到四区不同密度的菌 体去确认是否纯化，我们的获菌区为第三区，因此区必 须有菌落并且量要多。 (4)脂肪酸鉴定的前处理F1柚幽黜 脂肪酸鉴定的前处理工作主要为脂肪