离体蟾蜍心脏灌流.docVIP

肾上腺素拮抗低钙、高钾、ACh、酸降低心缩力的作用 说明： 1、本次课请上生理科学在线课程网站（10.71.149.149:90）自主学习授课视频和实验操作操作视频。网站登录时，班级项请正确输入，A班输入：8A，B班输入：8B。 2、本次实验的心脏插管操作有一定难度，同学们务必熟记离体心脏插管术的操作要点及实验流程要点。 3、因课时不足，翻转课堂改为课堂讨论。 4、自主学习和课堂讨论请参考本刚要中的“讨论”问题。 【目的】 1、探讨肾上腺素拮抗低钙、高钾、ACh、酸降低心缩力的作用及机制。 2、知道离体心脏灌流的方法和原理。 3、知道肾上腺素拮抗低钙、高钾、 ACh、酸降低心缩力的作用的实验设计原理和方法。 一、实验方法 1、材料 蟾蜍或蛙；任氏液，无钙任氏液，氯化钙，氯化钾，肾上腺素(adrenaline，Adr），乙酰胆碱(acetylcholine，ACh)，乳酸；张力换能器，RM6240多道生理信号采集处理系统。 2、方法 （1）实验装置连接和仪器参数设置 张力换能器输出接RM6240微机生物信号处理系统第1通道，通道时间常数为直流，滤波频率30Hz，灵敏度7.5g，采样频率800Hz，扫描速度 1s/div。 （2）离体心脏制备 蟾蜍毁脑脊髓，蟾蜍仰卧于蛙板，开胸暴露心脏，靠头端结扎左主动脉，结扎下腔静脉，在左、右主动脉下穿线，在左主动脉结扎线下剪一斜口，将插管插入动脉圆锥，在心室收缩时将插管插入心室，结扎固定，游离心脏。 （3）心脏与换能器连接 仪器调零。将蛙心插管固定在夹具上，与张力换能器相连的蛙心夹在心舒张期夹住心尖。加1mL灌流液，调微调使心脏舒张期张力至1g。 3、实验观察 （1）任氏液灌流 RM6240系统扫描速度调整为5s，向插管中加入1mL任氏液，稳定10min以上，心搏曲线稳定后记录正常的心搏曲线1min2.5 加任氏液30?L，稳定后记录45s数据。 （2）高钙任氏液灌流 用任氏液洗脱3次，加入1mL任氏液，待曲线稳定后记录45s数据，向灌流液加 0.045mol/L CaCl2溶液25?L，心搏曲线稳定后记录45s数据。 （3）无钙任氏液作用及肾上腺素的拮抗 用1mL无钙任氏液替换插管内的任氏液，心搏曲线稳定后记录45s数据；加入6×10-5 mol/L 的 Adr 溶液10?L，心搏曲线稳定后记录45s数据，然后用正常任氏液冲洗。 （4）高钾任氏液作用及肾上腺素的拮抗 加1mL任氏液，待曲线稳定后记录45s数据，向灌流液加0.2 mol/L KCl溶液20?L，心搏曲线稳定后记录45s数据，再加入6×10-5 mol/L 的 Adr 溶液10?L，心搏曲线稳定后记录45s数据，然后用正常任氏液冲洗。 （5）乙酰胆碱任氏液作用及肾上腺素的拮抗 加1mL任氏液，待曲线稳定后记录45s数据，向任氏液中加6×10–6 mol/L 的 ACh溶液15?l，曲线稳定后记录45s 数据；再加入6×10-5 mol/L 的 Adr 溶液10?L，心搏曲线稳定后记录45s数据，然后用正常任氏液冲洗。 （6）乳酸任氏液作用及肾上腺素的拮抗 加1mL任氏液，待曲线稳定后记录45s数据，向灌流液加0.2 mol/L 乳酸溶液20?L，待心搏曲线稳定后记录45s数据，再加入6×10-5 mol/L 的 Adr 溶液10?L，心搏曲线稳定后记录45s数据，然后用正常任氏液冲洗。 （7）数据测量 测量各项处理前后的心率（heart rate，HR)、心脏舒张末期张力（end diastolic tension，EDT)、心脏收缩末期张力(End systolic tension，EST)。 （8）统计方法 结果以(x(s表示，统计采用Student t test方法。 二、讨论 1、仪器的连接和参数设置 （1）张力换能器连接RM6240多道生理信号采集处理系统哪个通道？ （2）仪器参数、标记组如何设置？ （3）参数设置错误会对结果造成什么影响?举例说明。 （4）仪器如何进行零点校正？在什么时候进行零点校正？为什么要零点校正？ （5）本实验有哪些实验效应指标？如何测量？指标的生理意义？ 2、离体蟾蜍心脏插管术 （1）蟾蜍毁脑脊髓要达到的程度？ （2）开胸手术及要点？ （3）如何分离动脉？如何结扎动脉？操作要点？ （4）下腔静脉结扎部位？结扎下腔静脉怎么操作？关键点？如何判断结扎正确与否？ （5）心脏插管的切口部位、大小？用何器械做切口？ （6）插管前插管如何处理？插管如何操作？如何将插管从动脉圆锥插入心脏？插入心室的时机？关键点？ （7）插管深度？如何判断？如何结扎固定？打结有何技巧？ （8）如何游离心脏？需要保留哪一结扎线？关键点？冲洗要求？ （9）良好的离体心脏其收缩活动、节律、插管液面运动应该