结核性腹膜炎应用结核感染T细胞斑点试验的临床诊断分析.docVIP

精品论文 参考文献 结核性腹膜炎应用结核感染T细胞斑点试验的临床诊断分析 易平1 邹义洲2（通讯作者） 　　1中南大学 湖南长沙 410000；2湘西自治州人民医院 湖南湘西 416000 　　摘要：结核性腹膜炎是一种因结核杆菌而产生的腹膜炎症，感染方式可从腹膜内结核延伸或扩散开来。临床上已有诸多关于结核感染T细胞斑点试验在结核感染所诱发的胸腔积液、胸膜炎等病症中的诊断分析，但关于其在结核性腹膜炎中的诊断分析的报道却极少。本文从结核感染T细胞斑点试验的原理、检测方法及其在结核性腹膜炎中应用等方面进行论述，以探讨其临床应用价值。 　　关键词：结核性腹膜炎；结核感染T细胞斑点试验；临床诊断 　　结核性腹膜炎是一种因结核杆菌而产生的腹膜炎症，属于结核病范畴。在人们生活环境不断恶化以及人类自身素质逐渐减弱的情况下，结核性腹膜炎患者的数目越来越多，再加上该疾病自身存在的特殊性，给临床诊治带来了巨大的压力与挑战。因此，进行疾病预防及初期诊断就显得非常重要。临床上，诊断结核病的方法主要为结核菌素试验，但由于其假阳性率偏高，再加上患者自身身体状况的影响，诊断结果并不理想。结核感染T细胞斑点试验技术是由酶联免疫斑点技术发展而来的，主要通过检测结核感染后T淋巴细胞分泌的细胞因子IFN－gamma;来判断是否发生结核感染，它是一项诊断结核的有效辅助方法，其敏感性与特异性均较强，在结核病的诊断上具有较高的临床应用价值[1]。 　　1 结核性腹膜炎 　　结核性腹膜炎是临床上一种较为常见的肺外结核病，约占结核病各疾病类型的5.0%，约占腹部结核各疾病类型的45%。结核性腹膜炎的致病原理为因结核杆菌感染所诱发的慢性弥漫性腹膜感染，感染常从原发肠系膜结核、肠结核、阑尾结核、输卵管结核等通过淋巴或血行扩散至腹膜所致[2]。结核性腹膜炎患者的临床表现、影像特征等同癌性腹膜炎极为类似，特别是对缺少原发肿瘤病患者而言，其临床表现于影像特征则更为相似，极难对二者进行辨别，因此也常常会出现误诊、错诊。在临床治疗上，结核性腹膜炎属于一种良性病症，可以借助药物彻底治愈，因此初期对其进行诊治能够有效控制结核的扩散，进而提升治疗效果，改善预后，帮助患者快速恢复健康。 　　2 结核感染T细胞斑点试验的原理 　　结核感染T细胞斑点试验技术是当下最敏感的检测抗原特异性T细胞的手段之一，能检测出1/100000～1/50000外周血单个核细胞中某种抗原刺激后释放某种细胞因子的细胞，酶联显色后，应用EL IS－POT分析系统可对斑点进行计数，1个斑点表示1个细胞，进而计算出抗原特异性细胞的频率。结核感染T细胞斑点试验通常可在24h内完成，因此可为患者争取到更多的治疗时间[3]。 　　结核感染T细胞斑点试验的原理可以简单总结为：用事先设定好的抗体抓取培养中细胞所分泌的特殊细胞因子，采用酶联斑点显色的方式将其表达出来的一种检测手段。 　　3 结核感染T细胞斑点试验的检测方法 　　取外周血4mL置于真空采血管内，快速混匀，4h内进行外周血单核细胞分离。离心管中事先添加PRMI 1640液4mL，把已混合均匀的抗凝全血注入离心管中，混匀。 另取一离心管，事先注入2mL淋巴细胞分离液，把混匀的8mL细胞悬液慢慢注入淋巴细胞分离液上方，1800g/30min离心，用加样枪取出白细胞层并置于15mL离心管中。添加PRMI 1640液至11mL，600g/7min离心，舍去上清液；添加AIM－V培养液至11mL，350g/7min离心，舍去上清液。添加AIM培养液00.7mL，摇匀至细胞悬液混匀。提取10mu;L细胞悬液于40mu;L锥虫兰染液中混匀，提取10mu;L添加细胞计数板上计数。将各标本调整至2500times;10?个PBMC/mL。取T-SPOT.TB试剂盒内微孔板，1个标本对应4个微孔板，做好记号后按顺序注入 AIMV 50mu;L于阴性对照孔内，50mu;L抗原A至抗原A孔，50mu;L抗原B至抗原B孔，50mu;L阳性对照至阳性对照孔内，各孔均添加已备好的100mu;L细胞稀释工作液。把培养板置于5%二氧化碳培养箱中18h，舍去孔内液体，用无菌PBS洗涤。添加50mu;L新配制的酶标抗体工作液，把培养板置于6℃环境下1h。用PBS洗涤去除结合的酶标抗体。各孔添加50mu;L显色液，静置7min，用蒸馏水冲洗，终止反应后置于相差显微镜下查看结果并进行斑点计数[4-5]。 　　4 结核感染T细胞斑点试验的结果判断 　　结核感染T细胞斑点试验的结果明确，容易判断。将空白对照、阳性对照及ESAT－6和CFP－10肽段库当作刺激原的两个实验孔。试验有效：空白对照孔内斑点数＜10，且阳性对照孔内斑点数＞20；阳性：空白数＜6且任一实验孔斑点数减去空白对照后ge;6，或空白对照孔内斑点