第二章2工具酶.ppt.Convertor.doc

为什么能把一种生物的基因“嫁接”到另一种生物上？ 推测这种“嫁接”怎样才能实现？ DNA是生物的主要遗传物质 DNA都是由四种脱氧核苷酸形成的规则的双螺旋结构 第二节 工具酶 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 基因工程的概念 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与运载体DNA连接 关键步骤三： 抗虫基因导入受体(棉花)细胞 基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。 是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切” 和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的新的生物类型和生物产品 基因工程 基因工程操作的工具 将目的基因片断从受体细胞内提取， 需要基因的剪刀——限制性核酸内切酶。 将目的基因与质粒DNA连接， 需要基因的针线——DNA连接酶。 将目的基因运入大肠杆菌， 需要基因的运输工具——运载体。 基因工程所需的基本条件 C 用于基因转移的受体菌或细胞 B 用于基因克隆的载体 A 用于核酸操作的工具酶 用于核酸操作的工具酶 基因的剪刀——限制性内切酶 限制性内切酶(简称限制酶)。主要存在于微生物中。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子 工具酶 基因工程中的工具酶主要包括用于DNA和RNA分子的切割、连接、聚合、逆转录等相关的各种酶类。 一、限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE) 限制性内切酶的发现 1960年，瑞士科学家阿尔伯在观察大肠杆菌时，发现了一种酶。这种酶，它能识别DNA顺序上特定的DNA位置并在这一位置进行切割。这种酶被称为限制性内切酶，后来被广泛地使用于基因工程中，阿尔伯因此荣获了1978年度诺贝尔奖。 限制性内切核酸酶(restriction endonuclease) 是一类能识别双链DNA 中特殊核苷酸序列，并在合适的反应条件下使每条链一定位点上的磷酸二酯键断开，产生具有5’—磷酸基和3’—羟基的DNA 片段的内切脱氧核糖核酸酶。 1 定义 是一类由细菌产生的能专一识别和切割双链DNA中的特定碱基序列的核酸内切酶，简称限制酶或切割酶。 根据限制酶作用特性，一般分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型， 其中常用的是Ⅱ型限制酶。 定义 2 限制性内切酶的分类 I型酶: 能识别特定核苷酸序列，但切割作用却是在识别位点1000kb以外随机进行的，具内切酶活性和甲基化酶活性，需ATP,Mg2+和S-腺苷甲硫氨酸为辅因。如 EcoB, 和EcoK。 Ⅱ型酶 只有内切酶活性，且内切作用具有序列特异性。是目前最常用的内切酶。 Ⅲ型酶 也可识别特定序列，但在距识别序列25bp处往往有多个切割位点，无特异性，具内切酶活性和甲基化酶活性，需ATP,Mg2+和S-腺苷甲硫氨酸为辅因。 12 3 II型核酸内切酶识别序列的基本特征 1特异性识别位点：4-8bp，多数6bp 2结构特征：旋转对称的回文结构 3切割后产生的末端：粘性末端或平末端 EcoR I的识别序列 5’…G C T G A A T T C G A G … 3’ 3’…C G A C T T A A G C T C … 5’ EcoR I的切割位点 回文序列：指在双链DNA序列中按确定的方向阅读，双链中的每一条链的序列都是相同的。 * 识别序列呈典型的旋转对称型回文结构;大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧. 落雪飞芳树﹐幽红雨淡霞。薄月迷香雾﹐流风舞艳花。 其诗又可回读为﹕ 花艳舞风流﹐雾香迷月薄。霞淡雨红幽﹐树芳飞雪落。 1991 年……第二个回文数2002 赏花归去马如飞，去马如飞酒力微。酒力微醒时已暮，醒时已暮赏花归。（秦观） 回文 回文结构(palindrome) 14 回文序列 回文：原意指指顺读和倒读都一样的词语。 回文序列：按一定方向阅读都一样的序列。 清代女诗人吴绛雪的《四季回文诗》 《春》：莺啼岸柳弄春晴，夜月明。 莺啼岸柳弄春晴，柳弄春晴夜月明。明月夜晴春弄柳，晴春弄柳岸啼莺。 《夏》：香莲碧水动风凉，夏日长。 香莲碧水动风凉，水动风凉夏日长。长日夏凉风动水，凉风动水碧莲香。 《秋》：秋江楚雁宿沙洲，浅水流。 秋江楚雁宿沙洲，雁宿沙洲浅水流。流水浅洲沙宿雁，洲沙宿雁楚江秋。 《冬》：红炉透炭炙寒风，御隆冬。 红炉透炭炙寒风，炭炙寒风御隆冬。冬隆御