当归愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养的研讨.pdfVIP

一 46一 江苏农业科学 2013年第4l卷第2期 陶金华，江 曙，杨念云，等．当归愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养的研究[J]．江苏农业科学，2013，41(2)：46-49 当归愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养的研究 陶金华 ，江 曙 ，杨念云 ，段金廒 ，钱大玮 (1．南通大学，江苏南通226019；2．南京中医药大学，江苏南京210046) 摘要：为了建立当归愈伤组织的诱导及其细胞悬浮培养的技术体系，采用正交试验法研究不同植物生长调节剂 对当归叶柄、根尖和叶片愈伤组织诱导的影响，以及采用植物细胞悬浮培养技术研究当归不同外植体细胞的生长特性 及其活性成分的积累规律。结果显示，叶柄最易诱导出愈伤组织，其次是根尖和叶片，2，4一D对当归不同外植体愈伤 组织的诱导均具有极显著的效果，其中诱导叶柄和根尖愈伤组织形成的最佳组合均为 1．0m#L2，4一D+0．2m#L NAA+0．4m#L6一BA，诱导率达到80％以上。此外，当归根尖和叶柄细胞分别悬浮培养至 15、21d时，细胞量分别 为926．7、990．6mg／L；根尖细胞悬浮培养至21d时，阿魏酸和藁本 内酯的含量分别达到为96．6、167．5I~g／g。结论 为，当归叶柄和根尖均是诱导愈伤组织形成的适宜外植体和应用于细胞悬浮培养的最佳细胞来源。 关键词：当归；诱导；St伤组织；细胞悬浮培养 中图分类号：s567．239．048 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1302(2013)02—0046—03 当归[Angelicasinensis(Oliv．)Diels]为伞形科多年生草 3～5mm小段，接种于含有不同植物激素的MS培养基中， 本药用植物，以根人药，是我国大宗常用中药品种，具有补血 22℃进行培养，按正交试验设计进行，每项试验平行做 2 活血、调经止痛、润肠通便之功效u。当归主产于甘肃、云 组，每组接种 100个外植体。愈伤组织诱导率=形成愈伤组 南、四川、山西、湖北等地，有岷归(甘肃岷县)、云归(云南)、 织的外植体数／接种的外植体数 ×100％。 川归(四川)之分，一般认为甘肃岷县为其地道产区 。现代 1．2．2 细胞悬浮培养体系的建立 将愈伤组织继代培养 研究表明，当归药材中主要含有有机酸类、多糖、苯酞类等有 2～3次后，选取生长旺盛，质地疏松的愈伤组织约2．0g，接 效物质，具有平喘、抑制中枢、镇痛以及增强免疫力等多方面 种于装有 300mLMS液体培养基 的 1000mL三角瓶中， 的生物活性-一 。长期以来，当归生产对栽培技术和条件要 22℃、120#rain悬浮振荡培养。7d继代 1次，连续继代2— 求严格，且存在早期抽薹、根腐病和麻 口病，严重影响其优质 3次，将细胞悬浮培养物用 8O 目镍网过滤，滤液分装后继续 高产。本试验通过采用正交试验法系统研究不同的植物生长 培养，作为起始悬浮培养液。每隔3d取 3瓶细胞培养液进 调节剂对当归不同外植体愈伤组织诱导的影响，并建立当归 行离心(5000r／min×10rain)后，于6O℃烘干，测定细胞 细胞悬浮培养的技术体系，从而为培育当归无菌苗，解决生产 干重 。 中存在的早期抽薹、病虫害防治以及当归细胞生长、分化、代 1．2．3 当归细胞中有机酸及苯酞类成分的含量测定 将当 谢等方面奠定理论与应用基础。 归悬浮细胞培养液于 12000r／min离心 10min，弃上清液，在 细胞沉淀物中加入02 mL70％甲醇超声提取 2次，每 次 1 材料与方法 30min，然后进行提取液的浓缩，得样品溶液。色谱条件：色 1．1 材料 谱柱Aequityuple@ BEHcl81．7 m(2．1mm×50mm)；检 1．1．1 外植体 试验材料采 自甘肃岷县当归[Angelwasinen— 测器PDAehDetector；以甲醇 一0．5