第一讲基因工程概论及其应用.ppt

目的基因 基因的针线──DNA连接酶 　　连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 重播 导入 扩增 四个基本步骤： 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测和表达 三、基因工程基本步骤 例：抗虫棉的获得： 关键步骤： 提取抗虫基因； 与运载体的结合； 重组DNA导入棉花细胞 工具： 限制性内切酶； DNA连接酶； 运载体 三、基因工程基本步骤 第一步、目的基因获得 1.化学合成法 2.基因组DNA（鸟枪法） 基因组DNA文库—存在于转化细菌中、克隆载体携带的所有基因组DNA的集合 3.cDNA cDNA文库 4.聚合酶链式反应 PCR 提取目的基因的方法 　用限制酶切断成许多片段 ⑴直接分离基因——鸟枪法 　　将供体生物的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成功了。　　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。 三种目的基因提取的方法优缺点 优点 缺点 鸟枪法 反转录法 化学合成法 操作简便广泛使用 工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因 专一性强 操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高 专一性最强 仅限于合成核苷酸对较少的简单基因 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 第二步、目的基因与运载体结合 第三步：将目的基因导入受体细胞 导入 扩增 Eg：可以分泌人胰岛素 的细菌 常用的受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞 导入方式：主要借鉴细菌或病毒侵然细胞的途径 1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。 2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。 3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。 第三步：将目的基因导入受体细胞 第四步、目的基因的表达和检测 　　大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 转鱼抗寒基因的番茄 获得高产、稳产和具有优良品质的农作物和具有抗逆性的作物新品种。 1.基因工程与品种改良育种 三、基因工程应用 抗虫害的玉米 抗虫的基因来自苏云金杆菌。苏云金杆菌形成的伴胞晶体是一种毒性很强的蛋白晶体，能使棉铃虫等鳞翅口害虫瘫痪致死。科学家将编码这个蛋白质的基因导人作物，使作物自身具有抵御虫害的能力。 生长快肉质好的转基因鱼(中国) 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 转基因羊具有生长快、毛质、肉质好、疾病少及耐粗饲料等优点。 2、环境保护　 基因工程做成的“超级细菌”能吞食和分解多种污染环境的物质。 　　通常一种细菌只能分解石油中的一种烃类，用基因工程培育成功的“超级细菌”却能分解石油中的多种烃类化合物。有的还能吞食转化汞、镉等重金属，分解DDT等毒害物质。 3.基因工程与医学的关系 分子医学 molecular medicine （一）疾病基因的发现 （二）发展生物制药 基因工程药物 基因工程疫苗 （三）DNA诊断 基因诊断 基因诊断—用分子生物学的技术对引起疾病的原因--遗传基因,致病微生物和寄生虫,以及某些恶性肿瘤在基因水平上进行病原学和细胞遗传基因的检测和分析. DNA/RNA 基因工程与药物研制 我国生产的部分基因工程疫苗和药物 　　许多药品的生产是从生物组织中提取的。受材料来源限制产量有限，其价格往往十分昂贵。 　　微生物生长迅速，容易控制，适于大规模工业化生产。若将生物合成相应药物成分的基因导入微生物细胞内，让它们产生相应的药物，不但能解决产量问题，还能大大降低生产成本。 　　胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。 　　将合成的胰岛素基因导入大肠杆菌，每2000L培养液就能产生100g胰岛素！使其价格降低了30%-50%! （四）基因治疗 gene therapy 基因治疗—就是向有功能缺陷的细胞补充相应功能基因，以纠正或补偿其基因缺陷，从而达到治疗的目的。 基因置换 基因修正 基因修饰 产物补偿缺陷细胞 基因失活 反义技术封闭基