植物组织培养1410510622.docVIP

植物细胞组织培养：指在离体条件下利用人工培养基对植物器官、组织、细胞、原生质体等进行培养，使其长成完整植株。 细胞组织培养分类：植株培养、胚胎或子房培养、器官培养、茎尖分生组织培养、愈伤组织培养、细胞培养、原生质体培养。 在农业中的作用：应用于①快速繁殖和脱毒②花药培养和单倍体育种③胚培养、细胞突变体筛选④体细胞无性系变异与筛选⑤种质资源保存、基因库的建立⑥植物次生代谢产物的生产⑦原生质体培养和体细胞融合。 脱分化：在细胞组织培养中，一个成熟细胞或分化细胞转变成为分生状态的过程，即形成愈伤组织的过程。 再分化：植物的成熟细胞经历了脱分化之后，即形成愈伤组织之后，由愈伤组织能在形成完整的植株的过程。 培养基分类：简化培养基：培养基的主要成分为天然复合物，如马铃薯培养基又叫天然物培养基。合成培养基：培养基的主要成分为各种人工化合物，根据不同的培养需要，按一定的配方比例配制而成（１）固体培养基（２）液体培养基 外植体：在植物细胞组织培养中，由活体植物体上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等，即供组织培养的离体植物材料。 外植体再生植株的过程：接种培养-分化、增殖培养-生根壮苗培养-试管苗的移栽。 愈伤组织：在人工培养基上由外植体形成的一团无序生长的薄壁细胞。 胚状体：指在组织培养中从一个非合子细胞，通过合子胚相似的胚胎发生过程所形成的胚状结构。胚状体可以直接形成完整的植株。 器官发生：由愈伤组织的部分细胞在形态结构上发生特化，使之与正常的愈伤组织有所不同，或者由外植体的部分细胞不经愈伤阶段而直接转化成出原形成层细胞，在进一步依次分化，形成初生芽和初生根，进而形成一个完整的植株，因为芽和根是整个植物的一种器官，所以这一过程成为器官发生。 实验室设计和设备：①准备室、灭菌室、接种室、无菌培养室、（细胞学实验室、摄影室、培养大棚）②条件：温度23-27OC左右、湿度70-80%、光照强度1500-3000lx、光照时间10-16h③设备：培养瓶、培养架、超净工作台、灭菌锅、接种工具、细菌过滤器、瓶口封塞、定时器、温度控制器、增湿器、去湿机、光照培养箱等。 培养基:是组织培养中离体材料获取营养而赖以生存和发展的基质，是培养组织和细胞最重要的条件。培养基的组成对植物细胞的生长和代谢物质的生产影响极大。 外植体的种类：（1）带芽的外植体：包括茎尖、侧芽、原球茎、鳞芽、根茎连接处的萌蘖等。特点：形态建成已完成，易培养，遗传变异小，适宜离体快速繁殖，但易生根。培养诱导茎轴生长，抑制主轴发育，促进腋芽生长，产生丛生芽。（2）包括茎段、叶、根等营养器官及花茎、花萼、花瓣花药、子房、胚珠、幼胚、果实、种子等生殖器官。特点：分化已完成、须脱分化、难培养、较易产生变异，适宜做突变体筛选 外植体长成植株的几种再生类型：（1）微型扦插产生小植株（2）先形成愈伤组织，然后分化出芽和根（3）通过胚状体途径形成小植株。 消毒与灭菌的区别：消毒-采用物理或化学方法杀死物体表面的微生物。（不包括细菌的芽孢和真菌的孢子）灭菌-采用物理或化学方法杀死物体表面及其内部的一切微生物。（包括细菌的芽孢和真菌的孢子） 常用器具的清洗方法：两步法：先碱洗:肥皂粉洗，清水洗刷净。后酸洗:铬酸+硫酸混合物浸入玻璃器皿后，自来水冲洗净。蒸馏水冲洗，晾干（或烘干），消毒备用。洗涤时，先放入洗涤液或清洁液中浸泡一定时间，用流水冲洗30分钟，蒸馏水冲洗，烘箱中烘干 培养基主要成分：无机营养物、碳源和能源、维生素类、氨基酸及有机添加物、植物生长调节物质、琼脂、活性炭、PH值、水、肌醇。(四种典型培养基：MS、LS、B5、white.) 大量微量元素配制注意事项：个化合物须充分溶解才能混合；混合时，将Ca2+与SO42-、HPO42-错开，避免产生沉淀；混合时要慢慢加入溶液，边搅拌边混合，配好后溶液澄清才好；Fe盐，植物生长调节剂须单独配成母液；IAA、IBA、GA3溶于少量酒精；NAA溶于热水或少量酒精；2，4-D溶于NAOH；BA、KT溶于HCL；玉米素溶于少量酒精。 无菌外植体的获取 污染原因和预防措施-原因：外植体带菌、培养基及器皿灭菌不彻底、操作人员操作不当、接种工具灭菌不彻底等。措施：种子发芽获得无菌外植体；茎尖培养时，可在室内或无菌条件下对枝条进行预培养；避免阴雨天在田间采取外植体；对外植体进行消毒处理 快速繁殖的做法：外植体-芽的诱导和增殖-继代培养-移植-检测-生根培养。类型：原球茎、器官发生型、胚状体发生型、器官型、无菌短枝扦插。 快速繁殖意义：1）快繁可脱除无性繁殖植物体内的病毒，获得并保存无病毒种苗2）可加快繁殖系数低或种子繁殖困难的作物，如珍稀、特有或濒危种质资源3）加快繁殖不能用种子繁殖的植物或育种材料 4）