高三生物2010.07.23选三1.2基因工程基本操作程序.ppt

基因枪法： 10000个整合细胞/枪 气压 300-600米/秒 脱氧核糖核酸随机插入，原理不明 1987年，周光宇 中国的转基因棉花 原理不明 显微注射法 如何才能知道含有目的基因的运载体是否成功导入受体细胞？ （2）导入动物细胞 ？ 经胚胎移植，得到 转基因动物 （受精卵为主） Ca2+处理，形成感受态细胞 如何才能知道含有目的基因的运载体是否成功导入受体细胞？ （3）导入细菌细胞——繁殖快 经微生物培养，得到 工程菌 能吸收周围环境中的DNA 四环素 抗性基因 青霉素抗性基因 如何通过检测受体细胞中运载体上标记基因的表达，确定连锁的目的基因是否导入？ 对于这个重组质粒，该如何检测它是否被导入受体细胞？ 目的基因与标记基因连锁在一起 普通质粒 目的基因（抗虫基因） 标记基因（四环素抗性基因） 标记基因（青霉素抗性基因） 加入四环素的培养基 如何挑选出导入目的基因的受体细胞？ 加入氨苄青霉素的培养基 菌落中的所有细菌都具有氨变青霉素抗性基因， 也同时具有目的基因 受体细胞摄入重组DNA分子，就意味转基因成功吗？ 受体细胞 （1）是否插入染色体 1.2.4 目的基因的检测与鉴定 （2）是否转录 （3）是否翻译 （4）是否表现特定性状 分子水平检测 ——个体水平检测 1.2.4 目的基因的检测与鉴定 检测水平 步骤 检测内容 检测方法 结果显示 第一步 第二步 第三步 1.2.4 目的基因的检测与鉴定 检测水平 步骤 检测内容 检测方法 结果显示 分子水平检测 第一步 转基因生物染色体DNA上是否插入目的基因 分子杂交（DNA 与DNA之间 ） 是否成功显示出杂交带 第二步 目的基因是否转录出mRNA 分子杂交（DNA 与RNA之间 ） 是否成功显示出杂交带 第三步 目的基因是否被翻译成蛋白质 抗原-抗体杂交 是否成功显示出杂交带 个体水平检测 目的基因控制的性状是否出现等 ①目的基因产物是否出现 2）检测目的基因是否表达 （如：抗虫棉是否具有 ） ②检测目的基因控制的性状是否出现 （如：抗虫棉中是否能检测到 ） 毒蛋白 抗虫性 翻译水平的检测 个体水平的检测 若不能表达，要对目的基因（抗虫基因）进行修饰后，再次拼接、导入。 * 主要内容： （一）基因工程的概念 （二）基因操作的工具 （三）基因操作的基本步骤 （四）基因工程的发展 （五）基因工程的安全性 基因工程 别称 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 基因拼接技术 或 DNA重组技术 生物体外和体内 基因 DNA分子水平 转基因生物、基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 实质： 基因重组 复习：基因工程的概念 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 构建基因表达载体 棉花细胞 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 抗虫基因表达 1 2 3 4 以基因工程培育“抗虫棉”的过程为例： (含抗虫基因) 导入 组培 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 1.获取苏云金芽孢杆菌的抗虫基因 2.抗虫基因与运载体DNA连接 3.抗虫基因导入受体(棉花)细胞 4.检测抗虫基因是否导入、鉴定其是否表达 分子手术刀—— 限制性内切酶 分子缝合针—— DNA连接酶 分子运输车—— 运载体 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ 1.1 DNA重组技术的工具 1）来源： 2）作用特点： 3）功能： 4）作用结果： 5）举例： 主要是原核生物中分离纯化 特异性 识别、切割 黏性末端、或平末端 1.1.1分子手术刀——限制性内切酶（简称限制酶） 例：EcoRⅠ能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 识别特定序列（回文序列）、在特定位点切割 1.会出现相同的黏性末端 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 2.然后让两者的黏性末端的碱基互补配对，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 如果用不同的限制性内切酶切割，还会顺利形成重组DNA分子么？为什么？ 1.1.2 DNA连接酶——分子缝合针 磷酸二酯键（扶手），而非氢键（踏板） 两个相同的黏性末端的连接、或使平末端相连 形成磷酸二酯键 用DNA连接酶连接两个相同的黏性末端，需要连接几个位点？ 1）连接部位：2）结果： ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC TATCGTACGATATTTACTTAAGCCGTATG TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG 1）最常用载体： 2）必备的条件： ① ② ③ 3）其他常用种类 1.1.3 基因进入受体细胞的（运）载体——分子运输车 天然质粒普遍同时具有以上三个条件吗？ 目的基