原位PCR检测基因枪轰击和肌肉注射PRRSVORF5基因疫苗在BALBc小鼠体内动态分布规律研讨.pdf

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 原位PCR检测基因枪轰击和肌肉注射PRRSV‘ ORF5基因疫苗在BALB／c小鼠体内动态分布规律研究 豆文波1，2，程安春l，2+，汪铭书l。2，希尼尼根l，3，陈希文1，2，刘菲1，陈孝跃l，2， (1．四川农业大学动物科技学院，四川雅安625014；2．动物疾病与人类健康四川省重点实验室，四，l 雅安625014；3．内蒙古农业大学动物科学与动物医学学院，内蒙古呼和浩特010018) 摘要：将猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV 轰击和200lag、1001ag+1001xg 同时间取免疫部位肌肉、肠、肝、脾、肾、心肌、肺脏和脑等组织器官，多聚甲醛固定，石蜡包埋。用原 位PCR检测基因枪轰击和肌肉注射免疫后不同时间PRRSV BALB／c小鼠不同组织中的分布情况，检测结果如下：免疫后3h就在基因枪轰击组和肌肉注射各组BALB／c 小鼠的免疫部位肌肉、肠、肝、脾、肾、心肌、肺脏和脑中均检测到强阳性杂交信号；佐剂组各组织检测 到的阳性杂交信号在强度和存留时间上都强与同剂量肌肉注射组；基因枪组轰击组虽然导入疫苗剂量较 少，但是仍然在小鼠各组织中保留很长时间；肌肉注射组肌肉注射基因疫苗剂量越大，基因疫苗在被免疫 的BALB／c小鼠组织中保留时间越长。以上结果表明：肌肉注射基因疫苗剂量与基因疫苗在组织中存留时 间呈现正相关关系：基因枪轰击和肌肉注射都是PRRSVORF5基因疫苗良好的免疫途径；佐剂对疫苗的存 留有正协同作用。 ， 关键词：原位PCR；BALB／e小鼠；基因枪轰击； 肌肉注射；PRRSVORF5基因疫苗；分布； 猪繁殖与呼吸道综合征(Porcine and ReproductiveRespiratory 美国Il】，1990年在欧洲相继报道。近年来已蔓延至亚太国家和地区【21，是目前世界范围内造成养猪业经济损 到该病毒，以后在美国、加拿大、欧洲国家、中国以及日本陆续分离到该病毒【5。9】。该病毒为有襄膜的单股 白GP5蛋白，GP5蛋白是PRRSV的主要结构蛋白，可刺激机体产生中和抗体和细胞免疫反应，实验证明， 猪感染PRRSV后，机体免疫系统被激活，会产生一系列针对不同蛋白的抗体，并可通过几种不同血清学 方法可检测到【l们。 抗体后，多克隆抗血清主要识另JoP5蛋白，这提示GP5蛋白在感染的晚期可能诱导产生中和抗体1111。 由于空气传播、持续感染、亚临床感染、免疫抑制和继发感染等因素的存在，使PRRS的防疫工作面 临巨大困难Il2‘乃J。目前预防畜禽传染病的最有效的方法是免疫接种，当前应用的一些灭活苗和弱毒苗对 PRRS的防治工作起到了很重要的作用，但灭活苗和弱毒苗在免疫力和安全性方面均存在着一定的缺陷。 Acid 基因疫苗的出现给PRRS的防治带来了新的希望，基因疫苗(Nucleicvaccine)由编码能引起保护性免 疫反应的病原体抗原的基因片段和载体构建而成，进入机体的基因疫苗不与宿主染色体整合，但它能够表 达蛋白，进而诱发各种免疫应答包括体液免疫应答和细胞免疫应答。与常规基因重组疫苗相比，基因疫苗 具有易于构建和制备、稳定性高等特点，能通过不同途径诱导机体产生体液和细胞免疫【l引。 本研究旨在检测我们实验室根据GP5蛋白是PRRSVfi,J主要结构蛋白的原理制备的四川分离株 PRRSV-SC2 以期探讨pcDNA．IL．2作为PRRSV-pcDNA。SC2．ORF5基囚疫苗的免疫佐剂的可行性。 本研究应用特异性强、敏感性高和定位精确的原位PCR技术成功地检测到保存于石蜡包埋的组织切片 24l 猪传染病 PRRSV ORFs基因疫苗的阳性杂交信号。从而为阐明PRRS基因疫苗的免疫机理和临床应用提供理论依据。 l材料与方法 ORF5基因疫苗(含PRRSVSC2株 1．1质粒及疫苗pcDNA3．1(+)质粒(invitrogen公司产品)，PRRSV 验课题组研制。 碱