黄曲霉毒素M1检测-PPT.pptVIP

乳制品中黄曲霉毒素M1的检测 黄曲霉毒素 黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 、寄生曲霉 产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。 B1 、B2和G1、G2，就是经常经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表。 B1和B2被奶牛吃了之后，分别有一小部分会转化为M1和M2进入奶中。这就是牛奶中黄曲霉毒素的来源。 黄曲霉毒素M1限量 GB2761-2011 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量 黄曲霉毒素M1检测方法 1，薄层层析法 2，液相色谱法 3，免疫化学分析方法 （1） 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和柱-HPLC法 （2） 酶联免疫吸附法： （3） 微柱筛选法 黄曲霉毒素M1检测方法 GB5009.24-2010食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定 GB5413.37-2010食品安全国家标准 乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定 GB/T23212-2008牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定 液相色谱-荧光检测法 GB/T18980-2003乳和乳粉中黄曲霉毒素M1的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法 黄曲霉毒素M1检测方法 黄曲霉毒素M1检测方法 黄曲霉毒素M1检测方法 GB5413.37-2010食品安全国家标准 乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定 第一法 免疫亲和层析净化 液相色谱—串联质谱法 第二法 免疫亲和层析净化高效液相色谱法 第三法 免疫层析净化荧光分光度法 第四法 双流向酶联免疫法 第一法 免疫亲和层析净化 液相色谱—串联质谱法 原理 试样液体或固体试样提取液经均质、超声提取、离心，取上清液经免疫亲和柱净化，洗脱液经氮气吹干，定容，微孔滤膜过滤，经液相色谱分离，电喷雾离子源离子化，多反应离子监测（MRM）方式检测。基质加标外标法定量。 第二法 免疫亲和层析净化高效液相色谱法 原理 亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1 特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，当试样通过亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体—抗原复合体。用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M1 含量。 SPE设备 M1免疫亲和净化柱 有1ml和3ml管两种，3ml比较好操作。 活化：柱中PBS缓冲液滴完后再加入3ml水 滴至填料上约1cm关闭阀门，待上样。 操作步骤 牛奶或酸牛奶样品：称取25g样品，调pH7.4（纯牛奶一般可不调），加入水定容50 ml，振摇混匀，10000r/min高速离心。用吸管吸取中间清液到25.0 ml比色管中，过免疫亲和净化柱，用3ml水淋洗，抽干，3ml甲醇洗脱（先浸泡1min再打开阀门），将洗脱液于40℃,氮吹近干，加10%乙腈定容1.0 ml，涡旋混匀、离心、滤膜过滤，待测。 操作步骤 奶粉样品：称取5g样品，加入30ml水，超声震荡15min溶解，加入水定容50 ml，振摇混匀，10000r/min高速离心。用吸管吸取中间清液到25.0 ml比色管中，过免疫亲和净化柱，用3ml水淋洗，抽干，3ml甲醇洗脱（先浸泡1min再打开阀门），将洗脱液于40℃,氮吹近干，加10%乙腈定容1.0 ml，涡旋混匀、离心、滤膜过滤，待测。 液相法色谱条件 色谱柱为XB-C18色谱柱（150 mm×4.6 mm, 5 μm i.d.）；柱温为35℃；流速为1.0 mL/min；流动相A为水，B为甲醇，进样量50 μL；检测波长：Ex365nm，Em435nm。 谱图 色谱条件 如同时检测AF B1、B2、G1、G2和M1 可采用GB/T23212-2008牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定 液相色谱-荧光检测法 使用柱后衍生法，衍生液为50mg/L的过溴化氢溴化吡啶：称取50mg过溴化氢溴化吡啶加入50ml乙腈溶解，加纯水定容1000ml，混匀，避光，备用。 衍生剂流速：0.3ml/min 衍生温度：35℃ 波长： Ex355nm，Em430nm Waters二元柱后衍生系统 谱图 液质法条件 色谱柱为BEH-C18色谱柱（100 mm×2.1 mm, 1.7 μm i.d.）；柱温为35℃；流速为0.3 mL/min；流动相A为0.1%甲酸，B为乙腈，进样量10 μL。 质谱条件 离子源：电喷雾离子源（ESI）；ESI模式：正离子模式；扫描方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压：3.0KV；雾化气（N2）流速： 700L/h ；干燥器（N2）温度：400℃；反吹气（N2）流速：50L/h；定性离子、定量离子、碰撞能量等参数见表。