肉蔻五味丸对大鼠梗死心肌c-Fos蛋白表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 肉蔻五味丸对大鼠梗死心肌c-Fos蛋白表达的影响 郝雷1 刘志跃1 焦效兰2 （1内蒙古医科大学病理生理教研室 内蒙古呼和浩特 010059；2宁波大学医学院 浙江宁波 315211） 【摘要】 目的 探讨蒙药肉蔻五味丸对大鼠梗死心肌c-Fos蛋白表达的影响。方法 SD大鼠60只，随机分为正常对照组（C组）、心肌梗死模型组（MI组）、卡托普利治疗组（Cap组）、蒙药治疗组（MD组）。大鼠腹腔注射异丙肾上腺素（ISO）造模，Cap组和MD组分别给予卡托普利50mg/kg?d、肉蔻五味丸1g/kg?d灌胃，至各相应时段。称重并计算左室重量指数(LVWI)，镜下观察心肌病理变化，免疫组化SABC法测定心肌c-Fos的表达。结果 MI组大鼠LVWI比C组升高，c-Fos表达在各时段比C组明显增加; Cap组和MD组与MI组相比，LVWI、c-Fos表达均不同程度下降。结论 蒙药肉蔻五味丸可降低心肌梗死大鼠左室重构心肌的c-Fos表达，可能是其干预心室重构的机制之一。 【关键词】肉蔻五味丸 心肌梗死 c-Fos 原癌基因c-fos属早反应基因，编码核内转录因子,调控着细胞增殖与分化。c-Fos蛋白是此基因产物，其在心肌梗死后的异常表达可引起多种病理变化。蒙药肉蔻五味丸由肉豆蔻、广枣、木香、土木香、荜茇组成，功能主治祛心“赫依”病。本实验通过研究肉蔻五味丸对c-Fos表达的影响进一步探讨其对心肌梗死后左室功能的干预。 1 材料与方法 1.1 实验动物 雄性SD大鼠60只，体重200plusmn;20g，合格证号：SCXK浙2003-0001，由浙江省医学科学院动物中心提供。 1.2 主要试剂及设备 异丙基肾上腺素购自上海禾丰制药有限公司（批号，卡托普利片购自安徽芜湖市博英制药有限公司（批号，肉蔻五味丸由内蒙古乌兰浩特市中蒙制药有限公司提供（批号，大鼠免疫组化SABC试剂盒购自武汉博士德生物技术公司。多导电生理记录仪（ML785 SP9612 PowerLab /8spADI，澳大利亚）；病理图像分析系统（OLYMPUS CX40 Logene-Ⅰ PAS9000）。 1.3 模型复制及分组 将60只SD大鼠随机分为正常对照组（C, n=6）、心肌梗死模型组（MI, n=18）、卡托普利治疗组（Cap, n=18）、蒙药治疗组（MD, n=18）。参照文献，模型组和治疗组大鼠腹腔注射异丙基肾上腺素（ISO）50mg/kg?d，连续3天，并以注射ISO3天后心电图出现Q波，S-T段抬高等改变来判断模型成立[1]。Cap组和MD组在注射ISO第3次后12小时开始分别给予卡托普利50mg/kg?d、肉蔻五味丸1g/kg?d 灌胃，MI组则等体积的生理盐水灌胃。各组实验动物在开始灌胃后1d、7d、28d相应时段用3%戊巴比妥钠（50mg/kg）腹腔麻醉后分别处死6只，迅速分离出左心室，称重。取部分心尖处组织置于10%甲醛液中固定。C组则于28d时全部处死。 1.4 左室重量指数(LVWI)测定 大鼠处死后，立即取出心脏，剪去心房和血管部分，小心分隔左心室(左心室部分包括室间隔)，滤纸吸干，在精密天平上称重。按公式：左室重量指数=左心室重量mg/体重g来计算左室的相对重量。 1.5 光镜下观察心肌病理改变 经10%甲醛固定的心肌组织，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡，石蜡包埋，做4mu;m厚连续切片，部分进行常规HE染色，光镜下观察，余下做免疫组化。 1.6 免疫组化检测心肌c-Fos表达 采用SABC法，依照试剂盒说明书进行操作。一抗为c-Fos兔抗鼠多克隆抗体，滴度1：75，阴性对照滴加PBS。图像分析系统处理、记录。 1.7 统计学处理 实验数据均以-xplusmn;S表示，两组资料之间的比较用t检验，多组资料使用方差分析，两两比较采用q检验。P＜0.05为有显著性差异。所有统计均使用SPSS13.0软件包。 2 结果 2.1 左室重量指数(LVWI) 心梗7d、28d时MI组大鼠LVWI比C组明显升高（分别plt;0.01,plt;0.05）。各用药组与MI组相比均降低;其中，28d时与MI组相比差异有统计学意义（分别plt;0.01, plt;0.05）。（表1、2） 表1 心梗大鼠正常对照组及模型组体重、左室重、左室重量指数 （-xplusmn;S 每组n=6） 与C组相比 △ p＜0.05 ▲