肺结核诊断中核酸扩增检测结核杆菌DNA方法的运用.docVIP

精品论文 参考文献 肺结核诊断中核酸扩增检测结核杆菌DNA方法的运用 长沙市中心医院 湖南长沙市 410004 【摘 要】目的：探讨肺结核诊断中核酸扩增检测结核杆菌DNA的临床应用价值。方法：选取2013年5月~2015年5月收治于我院的114例肺结核患者作为研究对象，按照随机的原则将其分为观察组和对照组，每组各57例，收集两组患者清晨痰液，其中观察组采用核酸扩增荧光定量聚合酶链反应（PCR）进行检验，对照组采用涂片抗酸杆菌镜检进行检验，比较两组患者的检验结果。结果：观察组患者共检测出阳性52例，阳性率为91.23%；对照组共检测出阳性48例，阳性率为84.21%。观察组患者检测的阳性率、检测的特异性和敏感性均高于对照组，两组相比较Plt;0.05，差异具统计学意义。结论：肺结核的临床诊断采用荧光定量聚合酶链反应法可有效的提高检测的阳性率，更好的指导临床的治疗，具有重要的临床应用价值。 【关键词】肺结核；荧光定量聚合酶链反应；涂片； 肺结核是由结核分枝杆菌所引起的肺部慢性传染性疾病，该病的传染率较高，主要是由于排菌患者排出病菌引起感染，随着社会的发展，肺结核的发病率和死亡率不断升高，严重威胁人们的身体健康和生活质量[1]。肺结核早期的诊断对于治疗具有重要的意义，但是目前诊断肺结核的方法较多，而快速有效的方法却较少，因此有效的肺结核诊断方法至关重要。本文选取2013年5月~2015年5月收治于我院的114例肺结核患者作为研究对象，按照随机的原则将其分为观察组和对照组，分别采用核酸扩增荧光定量聚合酶链反应（PCR）和涂片抗酸杆菌镜检进行检验，效果显著，现将结果报告如下。 1 资料和方法 1.1 一般资料 选取2013年5月~2015年5月收治于我院的114例肺结核患者作为研究对象，按照随机的原则将其分为观察组和对照组，所有患者均符合中华医学会结核病制定的肺结核诊断标准，并经胸部影像学检查、病理学检查得到确诊。其中观察组57例，男31例，女26例，年龄在20~78岁之间，平均年龄（59.73plusmn;8.86）岁；对照组57例，男30例，女27例，年龄在21岁~80岁之间，平均年龄（59.81plusmn;8.93）岁。两组患者在性别、年龄等一般资料方面无显著性差异（Pgt;0.05），具有可比性。 1.2 检测方法 1.2.1 检测仪器 采用美国应用生物系统中国公司生产的核酸扩增实时荧光检测系统ABI 7300以及配套的试剂盒，采用OLYMPUS生产的显微镜。 1.2.2 标本采集 采集两组患者清晨深咳痰液，观察组患者采用PCR诊断试剂盒进行标本的存放，对照组患者则选用无菌的载玻片进行标本的存放，并及时的将标本送入实验室进行检验。 1.2.3 检测方法 观察组患者采用PCR进行检测，先在痰液中加入4倍体积的浓度为4%的NaOH，摇匀, 并置于室温下放置30min左右，进行液化。液化完成后吸取1ml左右标本并放入离心管中，加入0.5ml浓度为4%的NaOH后放在离心机上进行离心，转速为15000r/min，时间控制在5min。去除上清液，再沉淀部分加入1ml的生理盐水进行混合，然后再放入离心机离心5min，完成后再重复洗涤一次，沉淀后直接加入50#61549;l DNA提取液混合均匀后,沸水浴10min后，转至4℃静置6-8小时以保证充分裂解。再次10000 r/min离心5min，去上清液 2#61549;l 做 PCR 反应，取单管单人份 PCR 反应管若干，直接加入处理后的样品2#61549;l，8 000r/min 离心数秒，按下列条件进行 PCR扩增；93#61616;C120s预变性，然后按93#61616;C45srarr;55#61616;C60s，反应 10 个循环后，按 93#61616;C30srarr;55#61616;C45s，做30个循环，反应终止，最后到 Reporter 窗口下记录仪自动分析计算出 Ct值，即为所测结果。对照组采用涂片抗酸杆菌镜检法进行检验，痰液收集并制成涂片标本后，按照检验的操作规程严格进行操作，并用改良齐-尼氏法抗酸染色、脱色、复染后进行显微镜检测，在显微镜的100个视野中如果发现3~6条即为阳性。 1.4 统计学方法 采用统计学软件SPSS19.0对本次研究的数据进行统计学分析，计量资料采用（ ）表示，采用t检验，计数资料采用X2检验，以Plt;0.05表示差异具有统计学意义。 2 结果 2.1 两组患者临床检测的结果 观察组患者共检测出阳性52例，阳性率为91.2