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双水相萃取 制作人：程志发 主讲人：程志发（化学工程） 2017年10月25日 双水相萃取的原理 排斥作用 相平衡 两相 （二 ） 萃取原理当一定浓度的某种有机物水溶液与其它有机物水溶液或有机物水溶液与无机盐水溶液以一定体积比混合时，能够自然分相而且形成互不相容的双水相或者多水相体系，这就是我们所说的双水相体系。其利用物质在以聚合物水溶液和盐溶液组成的互不相溶的两水相间分配系数的不同而达到萃取效果 几种典型的双水相系统 聚丙二醇 聚乙二醇、聚乙烯醇 聚丙二醇 葡聚糖（ Dex ） 聚丙二醇 羟丙基葡聚糖 聚乙二醇（ PEG ） 聚乙烯醇、 Dex 聚乙二醇（ PEG ） 磷酸钾、硫酸铵 聚乙二醇（ PEG ） 硫酸钠、硫酸镁 硫酸葡聚糖钠盐 聚丙烯乙二醇 羧基甲基葡聚糖钠盐 甲基纤维素 羧甲基葡聚糖钠盐 羧甲基甲基纤钠盐 双水相现象最早可追溯到1896年，荷兰微生物学家B两ierinek将明胶和琼脂水溶液或明胶和可溶性淀粉的水溶液混合时发现了这一现象。到1956年，以Albertsson教授为首的研究小组将这一技术应用于生物物质的分配上来，才开始了真正的双水相分配技术研究与开发17l。 双水相系统一般可分为两大类，即聚合物/聚合物和聚合物／盐双水相系统，研究中用得最多的悬聚乙二醇（PEG)／葡聚糖(DEX)系统和PEG ／混合磷酸钾．系统，这是因为PEG和DEX)均已经过药理验证是无毒的。 影响双水相系统的因素 双水相系统的性质取决于很多因素，诸如聚合物的类型和分子量、温度及所含低分子量物质等都会影响相系统的性质。而生物物质在双水相系统中分配时，由于要分配的物质瓤备相组分之间的相互作用是个很复杂的关系，它涉及到氢键、电荷相互作用、范德华力、疏水性相互作用以及空间效应等。 因此，分配既与成相聚合物的分子量和化学性质有关，也与要分配的物质特性有关。 目前尚不能完全定量关联分配系数与一些因素的关系，主要还是通过实验来得到适宜的操作条件 双水相分配是一个平衡分离的过程，传统的液液萃取原理、设备和操作都可在双水相分配中应用，但与一些传统的分离方法相比，双水相分配技术有其独特的优越性。由于系统含水量多达75％～90％，两相界面张力很小 (O．0001～0．5mN／m)，有助于保持生物活性和强化相际间的质量传递，正如上面所提到的，影响双水相系统性质和生物物质分配有众多因素， 这就使我们可以通过改变某些操作因素来获得较高的分离选择性。 双水相的应用优势 双水相萃 取技术在蛋白质、 酶、 氨基酸的提取和分离中的应用 高分子和正负离子表 面活性 剂混合物 可形 成一 种新型双水相体系。肖进新等研 究蛋白 质在溴化 十二烷 基三乙铵 / 十二烷基硫酸钠与聚 氧乙烯 ( E 0 ) - 聚氧 丙烯 ( P0 ) 嵌段共聚物 ( E0 20P 080 ) 共组双水相体 系中的分 配。 通过在 高分子上接亲和配基, 研究蛋白质在带有 亲和配基高分子的双水相体系中的分配。将表面活 性剂富 集相稀 释或加 热高 分子富集相, 又可形成新的 双水相 体系, 由此可 进行蛋 白质 的多步分配。在蛋白质的分配完成之后, 通过将表面活性剂富集相，进一步稀释或将高分子 富集相 加热至 高分子浊 点以 上可将表面活性剂和高分子 与目标蛋 白质分 离。正负 离子 表面活性剂和高分子还可以循环使用 举列 双水相萃取法的一个主要应用是胞内酶提取。目前已知的胞内酶2000多种，由于提取困难而很少用于生产。 采用双水相系统可使欲提取的酶与细胞碎片以较大的分配系数分配在不同的相中，省去了离心分离或膜分离的步骤。 分离的纯度与色谱层析还有一定的距离。因此该技术用于初步纯化。 流程解释 利用高速珠磨机为设备, 将细胞破碎和双水相萃取同时在珠磨机内进行。由于珠磨机内有良好的混合条件, PEG、 无机盐和水得到充分混合,形成均匀的双水相分散体系。经过珠磨机加工的匀浆直接用离心机分相, 细胞碎片分配在下相, 胞内产物分配在上相。不仅节省了萃取设备和时间, 而且由于双水相对蛋白质具有保持活性的特点, 可以避免胞内产物的损失 在药物提取中优点 与传统的药物提取分离工 艺相比, 双水相萃取技术 有以下特点 ( 1 ) 含水 量高 ( 70 % ~ 90 % ) , 是在 接近 生理 环 境的 温度和体系中进行萃取 , 不会引起生物活性物质失活或变性; ( 2 ) 分相时间短, 自然分相时间一般为 5 ~ 1 5 m i n ,