第九章 免疫学应用 PPT.ppt

Ag* Ab Ag 标记抗原 特异性抗体 待测抗原 ( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物 分离Ag*-Ab 和游离Ag* 从标准曲线上读知含量 测定Ag*-Ab和/或游离Ag*放射性 放射免疫测定法(RIA)示意图 RIA法原理及标准曲线 75 50 30 10 0 1 10 100 1000 未标记抗原浓度（ng/ml) 结合/未结合的放射活性（%） 免疫印迹法(Immunoblotting) 是将凝胶电泳与固相免疫测定结合，先把电泳分区的蛋白质转移到固相载体，再用酶免疫、放射免疫等技术测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量。常用于检测多种病毒 如HIV 的抗体或抗原。 * 第九章 免疫学应用 第一节 免疫学防治 （一）人工自动免疫 给机体输入疫苗或类毒素等抗原物质，刺激机体产生特异性免疫力。免疫力出现较慢但持久，多用于预防。 1、死疫苗：用物理、化学方法杀死病原微生物制备而成的疫苗。如伤寒、霍乱、百日咳等。 2、活疫苗：通过毒力变异或人工选择法获得的减毒或无毒株。类似于轻症或隐性感染。如卡介苗、麻疹、风疹、脊灰疫苗。 3、类毒素：外毒素经0.3%~0.4%甲醛处理后失去毒性但保持抗原性的生物制品。如白喉、破伤风类毒素。 4、新型疫苗：亚单位疫苗、合成疫苗和基因工程疫苗。 （二）人工自动免疫的注意事项 1、接种对象 2、接种剂量、次数和间隔时间 3、接种途径 4、接种后反应 5、禁忌症 二、免疫学治疗 （一）人工被动免疫 是给机体输入抗体，使机体获得特异性免疫力。维持时间短，一般2~3周，多用于紧急预防。如抗毒素、人丙种球蛋白、人特异性免疫球蛋白。 （二）免疫增强剂 是增强、促进和调节机体免疫功能的生物或非生物制剂。主要用于肿瘤、免疫缺陷病和传染病的辅助治疗。 （三）过继免疫：分特异性和非特异性两种。 （四）免疫抑制剂 第二节 免疫学诊断一、体液免疫检测 （抗原或抗体的检测） 抗原-抗体反应包括沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体结合反应和中和反应等。 抗原-抗体反应可 用已知的特异性抗体检测未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的抗体。 免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技术、发光免疫分析等免疫标记技术提高了抗原抗体反应的敏感性。 抗原-抗体反应受多种因素影响 1 电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为 稀 释液 ，以供给适应浓度的电解质。 2 温度：一般常使用反应在37度水浴 或孵育箱中进 行。 3.酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度 为PH6~8。 抗原抗体的检测方法 凝集反应 沉淀反应 补体溶血反应 和补体结合反应 中和反应 用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应 凝集反应(Agglutination) 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集 现象，称为凝聚反应。 1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。 2、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。 血 球 凝 集 沉淀反应（Precipitation) 血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，如絮状沉淀。大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂扩散故也称免疫扩散。 单向免疫扩散(Single Immunodiffusion) 是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环，环的直径与抗原含量成正比相关。本法常用于测定血清IgG、IgM、IgA 和 C 3等的含量。 含抗体的凝胶 沉淀环 双向免疫扩散 （Double Immunodiffusion) 是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性 、组成和两种抗原相关性分析的检测。 免疫电泳（Immunoelectrophoresis) 是先将待侧血清标本作琼脂凝胶电泳，血清中各蛋白组分被分成不同的区带，然后与电泳方向平行挖一小槽，加入相应的抗血清，把分成区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩散，在各区带相应的位置形成沉淀弧。该法常用于血清蛋白种类分析，以观察Ig的异常增多或缺失。 火箭电泳 （Rocket Electroph