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四、α-淀粉酶的蛋白含量测定09版
生物技术专业系统实验（四） ——酶（蛋白质）工程实验IV;四、α-淀粉酶的纯度检测 （考马斯亮蓝G-250法）;1.目的意义; 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种方法，即凯式定氮法，双缩脲法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝-G250法（Bradford法）。
其中,Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。凯式定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以凯式定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。; 四种方法并不是在任何条件下都能适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都有其优缺点。在选择方法时应考虑???下方面：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费时间。
考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。 ;2.实验原理 --考马斯亮蓝G-250法;3.仪器设备;比色皿1套（4个）、玻璃皿1套；
双蒸水1瓶（50ml）、计时器1个、洗瓶1个；
记号笔1支; 玻棒1支、吸耳球1个、白瓷盘1个、试管架1个；
200μl-1000μl、20μl-200μl、0.5μl-10μl移液器各1支；小号、中号、大号枪头各1盒；
旋涡混合器1套（置于每组桌上）；
坐标纸（每人1张）;3.2 药品;4.实验方法;4.3 标准曲线的制备;
注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），可用塑料或玻璃比色皿，使用后立即用洗涤剂水润洗至比色皿无色→用自来水冲洗→用少量95%的乙醇润洗→蒸馏水润洗3次→倒置晾干。提示：塑料比色皿不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。
（3）、用标准蛋白质量（mg）为横座标，用吸光度值A595为纵坐标，作图，即得到一条标准曲线。由此标准曲线，根据测出的未知样品的A595值，即可查出未知样品的蛋白质含量。;5.实验报告;5.1 实验记录表;5.2 标准曲线;5.3 讨论;6.思考题
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