淀粉产生酶.pptVIP

淀粉酶产生菌的筛选 及酶活力测定 目的 1、掌握从土壤分离淀粉产生菌的方法和技术，从样品中分离出所需菌株。 2、学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养淀粉酶产生菌的培养和培养时间。 3、了解分光光度计法测定酶活力的原理及方法 原理 1.土壤中含有大量的微生物，将土壤稀释液涂在不同类型的培养基上，在适宜的环境中培养几天，细菌或者是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养集中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。故在淀粉培养基上长出的菌便是淀粉产生菌。在培养基上滴碘液，淀粉被分解掉的部分不显现蓝色，出现透明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断菌种产淀粉的能力。 α-淀粉酶可从淀粉分子内部切断淀粉的α-1,4糖苷键，形成麦芽糖、含有6个葡萄糖单位的寡糖和带有支链的寡糖，是淀粉的粘度下降，因此又称为液化型淀粉酶。淀粉遇碘呈蓝色。这种淀粉-碘复合物660nm处有较大的吸收峰，可用分光光度计测定。随着酶的不断分作用，淀粉长链被切断，生成小分子的糊精，使其对碘的蓝色反应逐渐消失，因此可以根据一定时间内蓝色消失的程度为指标来测定α-淀粉酶的活力 材料与试剂 土壤、超净工作台、培养皿、三角瓶、绳、纱布、高压灭菌锅、恒温培养箱、摇床、电子天平、广泛pH试纸、试管、报纸、刻度吸管、离心机、 碘液、2%可溶性淀粉、pH6.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、标准糊精溶液、0.5mol/L乙酸、0.85%生理盐水 培养基 分离培养基：　采用牛肉膏蛋白胨固体培养基加0.2%可溶性淀粉，即牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、可溶性淀粉2g溶于1000mL蒸馏水中，再加入15g琼脂粉，pH调至7.2，121℃灭菌20min，待冷却至50℃左右时，于超净工作台倒平板。 筛选培养基: 淀粉培养基（可溶性淀粉20g, 硝酸钾1g磷酸氢二钾 0.5g, 氯化钠 0.5g, 硫酸镁0.5g, 硫酸亚铁 0.01g, 琼脂 20g, 水 1000毫升，调整pH值到7.2～7.4。） 同学们批评指正。