生物制药课件-2-2.ppt

萃取分离技术;双水相萃取;超临界萃取;2.干燥：①低温真空干燥；②喷雾干燥；③冷冻干燥;第一节、 生物材料的预处理 ;一、选择预处理方法的依据 ;影响凝聚作用的主要因素有无机盐的种类、化合价以及无机盐的用量等。阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序为：Al3+Fe3+H+Ca2+Mg2+K+Na+Li+ 常用的凝聚剂有：Al2(SO4)3·18H2O、AlCl3·6H2O、FeCl3、ZnSO4、MgCO3等。 在发酵液中加入具有相反电性的电解质：①、中和胶粒电性，降低双电层排斥力。 ②、离子的水化作用，破坏胶粒的水化层。 ;2、加入絮凝剂 絮凝剂是天然的或人工合成的有机高分子化合物，如壳聚糖、海藻酸钠、明胶及酰胺类衍生物、聚苯乙烯类衍生物和聚丙烯酸类等。 絮凝剂具有长链线状的结构，易溶于水，其分子量可高达数万至一千万以上，在长的链上含有相当多的活性功能团。; 3、变性沉淀 4、等电点沉淀 5、加各种沉淀剂沉淀 6、吸附 ;第二节、 细胞破碎 ;一、机械法;三、化学法;第三节、 液-固分离; 凝胶层析(Gel chromatography) 分子筛层析、凝胶扩散层析、排阻层析、限制扩散层析等。 是将样品混合物通过一定孔径的凝胶固定相，由于各组分流经体积的差异，使不同分子量的组分得以分离的层析方法。 ;一、 凝胶层析的基本原理 ;流动分离理论 ;分离过程;分离过程;凝胶层析的特点;第二节 凝胶的结构和性质 ;一、葡聚糖凝胶 (Sephadex);保存;二、修饰葡聚糖凝胶 (Modified Sephadex); ;三、聚丙烯酰胺凝胶 ;四、琼脂糖类凝胶 （Sepharose ） ;琼脂糖凝胶特点;琼脂糖凝胶分离范围;（二）架桥琼脂糖凝胶（Sepharose CL） ;（三）超胶（Utro-gel ACA）; （四） Superose系凝胶 ;五、多孔玻璃微球(Bio-glas);六、疏水性凝胶（hydrophobic gels）;第三节 凝胶层析的实验条件和操作 ;一、凝胶的选择和处理;（二）凝胶粒度的选择;（三）凝胶的预处理;二、凝胶层析柱的设计和制备 ;（二）凝胶柱的装填;（三）凝胶床的检查和维护;操作压 ;三、凝胶层析操作; （二）洗脱与收集;（三）凝胶柱的再生;第四节 凝胶层析的应用;一、脱盐和浓缩;二、凝胶层析在生化制药中的应用;（二）分离纯化;一、 基本原理;离子交换剂;吸附;洗脱;树脂的选择;二、 离子交换树脂的结构和种类 ;阳离子交换树脂分类;阴离子交换树脂;离子交换树脂的性能 ;离子交换树脂的命名：;离子交换树脂的骨架（一）苯乙烯型离子交换树脂;（二）丙烯酸型离子交换树脂;丙烯酸型阳离子交换树脂;（三）其它离子交换树脂 ;三、离子交换速度;离子交换速度的影响因素：;四、 离子交换树脂的性能 ;一）、离子交换对树脂的基本要求：;二）、影响树脂性能的几个因素;六、离子交换操作方法 ;? 二）、树脂的处理和再生;氨基酸分离前树脂的处理;树脂的再生;三）、基本操作方法;酸、碱洗脱液：旨在改变吸附物的电荷或改变树脂吸附基团的解离状态，以消除静电结合力，迫使目的物被释放出来； 盐类洗脱液：是通过高浓度的同种电荷的离子与目的物竞争树脂上的活性基团，使吸附物解离。 ;洗脱方式;七、应用实例;氨基酸制备、分离;阳离子交换树脂用强酸性树脂，阴离子交换树脂可以用强碱或弱碱树脂。 强酸——弱碱 或 强酸——强碱； 当对水质要求高时，经过一次组合脱盐，还达不到要求，可采用两次组合: 强酸——弱碱——强酸——强碱； 强酸——强碱混合床。;混合床－无盐水;第六节 亲和纯化技术;技术要点;亲和纯化技术;一、 亲和层析;亲和吸附剂：载体—配基;一）、亲和层析的原理;二）、亲和层析载体;（二）、常用载体 ;1、纤维素;2、琼脂糖凝胶; ;5、多孔玻璃珠： 化学与物理稳定性较好，机械强度高。 缺点：亲水性不强，对蛋白质尤其是碱性蛋白质有非特异性吸附，化学活性基团少。 6、其它载体——壳聚糖;吸附法(adsorption method)指利用吸附作用，将样品中的生物活性物质或杂质吸附于适当的吸附剂上，利用吸附剂对活性物质和杂质间吸附能力的差异，使目的物和其它物质分离，达到浓缩和提纯目的的方法。 ;96;优点： (1)设备简单、操作简便、价廉、安全。 (2)少用或不用有机溶剂，吸附过程中pH变化小，较少引起生物活性物质的变性失活。 缺点： (1) 选择性差，收率不高。 (2)一些无机吸附剂性能不稳定。 ;一、 吸附法基本概念;二）、吸附类型;三）、影响吸附的因素 ;吸附剂及被吸附物极性对吸附的影响;无机：白陶土、氧化铝、硅胶、硅藻土 有机：活性炭、纤维素、大