第11章+生物素-亲合素放大技术(2011年+姚....ppt

第十一章 生物素－亲和素免疫放大技术;概述：;维生素H 动、植物组织中广泛 分布,卵黄和肝含量高 MW 244.31kD;选择题;一、活化生物素 ;生物素活化;长臂活化生物素 (BCNHS) 是在生物素和 N-羟基丁二酰亚胺之间添加了两个 6- 氨基己糖分子基团，形成连结臂， 使其与抗体、酶等生物大分子结合后，不受位阻效应的影响, 更易发挥生物素的活性作用;4.常用于标记抗体的活化生物素是（ ） A.BNHS B.BHZ C.BCNHS D.BCHZ E.MPB;标记蛋白质醛基的活化生物素;.常用于偏酸性抗原标记的生物素是（ ） A.BNHS B.BHZ C.BCNHS D.BCHZ E.MPB;标记蛋白质巯基的活化生物素;标记核酸的活化生物素;生物素脱氧核苷三磷酸（Bio-dUTP） 作为TTP（三磷酸胸苷）的结构类似物，可 采用缺口移位法掺入到双链DNA中;活化生物素通过侧链与蛋白分子连接 一个蛋白分子可被多个生物素标记－多价性 对BNHS多标记抗体, BHZ则多标记偏酸性抗原；抗原、抗体标记后活性不变 可对标记材料（如酶）标记：碱性磷酸酶标记后活性将降低;选择活化生物素：依抗原或抗体分子所带可标记基团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性 控制生物素:蛋白质比例 生物素:IgG 用量比(mg/mg)宜为2:1 IgG应用浓度0.5~5μg/ml 1~3个生物素/1个Ag，3~5个生物素/1个Ab 使用交联臂减少空间阻力;第二节 亲合素、链霉亲合素的理化性质与标记;亲和素（Avidin)耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用，与生物素 结合后稳定性更好。每个亲和素能结合四个分子的生物素;; 结构 四亚基糖蛋白 四肽链蛋白 无糖基 pI 10.5 6 结合位 色氨酸 色氨酸 生物素 4 4 K（亲和常数） 1015 1015 活性(U) 13～15 15～18;二、亲合素/链霉亲合素标记;第三节 生物素-亲合素系统的特点;第四节 生物素-亲合素系统的应用;一、生物素-亲合素系统基本类型及原理;返回;选择题;BA法（标记亲和素-生物素法） 特点：以标记亲和素/标记链霉亲和素（A-E/SA-E）代替BAB法中的游离亲和素（A），省却了加标记生物素（B-E）的步骤 ;+A-E;+;ABC法 原理示意图;+ABC;方法应用;二、亲合素/链霉亲合素标记;二、生物素-亲合素系统在酶免疫测定中的应用;;三、生物素-亲合素系统在荧光免疫技术中的应用;四、生物素-亲合素系统在放射免疫测定中的应用;五、生物素-亲合素系统在分子生物学中的应用;思考题;思考题;思考题;谢谢！